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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 小白求助~~水稻克隆基因全长
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钢盔1993

新虫 (初入文坛)

[交流] 小白求助~~水稻克隆基因全长

求助大神们~~~

水稻材料：一个育种材料
目标基因：Os*********
目的：克隆该基因全长

想询问，反转录后，进行PCR扩增时，这个引物该如何设计？
前期是根据参考基因组该基因的cDNA序列进行设计的，产物是1400bp左右。
但是跑出来只有200bp左右。

请问这种情况，可以直接根据参考基因组cDNA序列进行设计吗、？
还是必须使用其它的克隆方法？？

求求大神们了，已被困扰两月有余
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1楼2019-06-12 10:25:30
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★
钢盔1993(金币+2): 谢谢参与
先看看你的引物设计的序列特性性高不高，去blast比对一下，看看是不是扩增到其他基因上去了。其次，转录的cDNA用的什么组织，哪个时期的，查下文献看下你要扩增的基因在哪个时期和部位表达量最高，看看是不是表达量过低引起的。
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钢盔1993
21楼2019-06-18 21:23:38
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钢盔1993

新虫 (初入文坛)
大家不要光回复，请指导下可怜的我吧！

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6楼2019-06-13 12:40:30
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jiaoxg9楼
2019-06-13 15:41   回复  
钢盔1993(金币+2): 谢谢参与
xhmaohan7楼
2019-06-13 12:55   回复  
钢盔1993(金币+2): 谢谢参与
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hbabc12楼
2019-06-14 06:47   回复  
钢盔1993(金币+2): 谢谢参与
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M塞北11楼
2019-06-14 06:36   回复  
钢盔1993(金币+2): 谢谢参与
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南国小城13楼
2019-06-14 07:58   回复  
钢盔1993(金币+2): 谢谢参与
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