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小漫画正青春

新虫 (初入文坛)

[求助] DNA发夹结构的充分形成 HCR反应已有3人参与

想请教一下,一条发卡DNA,95℃变性以后怎么操作让DNA尽可能的全部转化为发卡结构啊,我是后续用来做HCR反应定量检测miRNA的应用
我看文献里写的是发夹DNA在95℃变性5min后,缓慢冷却至室温。①那这个冷却的过程是直接放在室内缓慢冷却还是在PCR仪上设置梯度降温比较好噢?如果设置②在变性之前,DNA粉末就直接加三蒸水配置就好了吗,还是说需要加 annealing buffer(退火缓冲液)?

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RCA.木子涵

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 学术渣渣程 at 2021-12-08 09:16:44
你好,我最近也是做发卡DNA的相关研究,我的做法是DNA用TE缓冲液溶解的,然后95摄氏度4分钟,室温下放置十分钟,因为无法判定能否形成发卡结构,所以跑了一下凝胶电泳,结果显示发卡结构的单链和互补链能结合,但是 ...

您好前辈,请问您现在问题解决了吗?您形成发夹的条件是什么呢?

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15楼2022-01-18 19:40:19
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南工邓

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-08-18 21:59:46
题主你好,我现在也在做这一方面的课题,可以交流一下。
我做的时候,就是直接放在室温冷却的,不过我使用热水浴,然后连同热水一起冷却,大概四个小时到室温。
然后DNA我是直接加buffer溶解,就是实验用到的缓冲液,不是退火缓冲液。
我现在也有困难,不知道题主做到什么地步了,希望与题主交流一下经验。
哈哈哈,人生且歌且酒且狂乐!
2楼2019-07-17 21:21:07
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西樵9797

新虫 (小有名气)

请问两条发夹dna能不能反应啊?

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3楼2019-08-18 19:43:51
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南工邓

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 西樵9797 at 2019-08-18 19:43:51
请问两条发夹dna能不能反应啊?

互补的情况下,需要外力打开发夹结构,比如加热,然后能互补形成双链。两个稳定的发夹结构,一般是不会自己打开的
哈哈哈,人生且歌且酒且狂乐!
4楼2019-09-09 19:48:10
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