| 查看: 5398 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
目的基因连接T载体 菌落pcr没有目的条带 已有3人参与
|
||
|
我PCR产物连接T载体，做蓝白斑筛选，都是白斑，挑但菌落，做菌落pcr，没有目的条带，难道都是假阳性吗？我菌落pcr引物跟目的基因一样 求指教 @飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有137人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
|
如果在你的感受态下空载体确定会显蓝斑而且没有涂错板子的话，建议先在基因插入位点前后100bp左右找两条引物合一下，毕竟这个载体以后可能还会再用的嘛。这个基因引物如果也没有条带就可以盲送试一下，如果扩出来是空载大小就要重做，建议首尾加重组臂做重组，效率会很高，平连效率还挺低的。 发自小木虫Android客户端 |
三只0小猪仔
7楼2019-06-03 08:45:41
2楼2019-06-02 15:51:44
|
你的pcr引物跟目的基因一样是无法从pcr来断定是否为假阳性的，推荐用载体上的插入位点前后一段200-300bp的基因做引物，这样可以判断是否为假阳性。然后蓝白斑筛选其实有一些感受态有表达缺陷，比如说jm110,在加了显色剂的平板上也不显色的。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2019-06-02 18:33:35
4楼2019-06-03 07:31:58