应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 目的基因连接T载体 菌落pcr没有目的条带
51/1返回列表
查看: 4959  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

三只0小猪仔

新虫 (初入文坛)

[求助] 目的基因连接T载体 菌落pcr没有目的条带 已有3人参与

我PCR产物连接T载体，做蓝白斑筛选，都是白斑，挑但菌落，做菌落pcr，没有目的条带，难道都是假阳性吗？我菌落pcr引物跟目的基因一样 求指教

@飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-06-02 15:26:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能都是假阳性，如果目的基因插入，不会所有的克隆没有目的条带的，可以多鉴定几个。另外，为什么要连T载呢？另外，没有做阳性对照吗？PU19的对照？
赞一下 回复此楼
5楼2019-06-03 08:02:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

花鸟画夜

新虫 (初入文坛)
是假阳性

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
2楼2019-06-02 15:51:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

眺望爱

铜虫 (初入文坛)
你的pcr引物跟目的基因一样是无法从pcr来断定是否为假阳性的，推荐用载体上的插入位点前后一段200-300bp的基因做引物，这样可以判断是否为假阳性。然后蓝白斑筛选其实有一些感受态有表达缺陷，比如说jm110,在加了显色剂的平板上也不显色的。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
目标：生物的星辰大海！！！！
3楼2019-06-02 18:33:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三只0小猪仔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 眺望爱 at 2019-06-02 18:33:35
你的pcr引物跟目的基因一样是无法从pcr来断定是否为假阳性的，推荐用载体上的插入位点前后一段200-300bp的基因做引物，这样可以判断是否为假阳性。然后蓝白斑筛选其实有一些感受态有表达缺陷，比如说jm110,在加了显 ...

那我要重新设计引物吗？还是多挑几个菌试一试，是PCR没有P出来吗？还是根本就没有连接上？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-06-03 07:31:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 【0856】化学工程（085602）313 分，本科学科评估A类院校化学工程与工艺，诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:06 by ruiyingmiao
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 4/200 2026-03-13 15:31 by 明天就好了
[考研] 285求调剂 +5 柴郡猫_ 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:56 by vgtyfty
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +5 RuitingC 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:43 by hyswxzs
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 420求调剂 +4 莫向外求11 2026-03-10 6/300 2026-03-12 14:41 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +8 ADT 2026-03-11 8/400 2026-03-12 12:24 by 黑钻子
[考研] 301求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-11 5/250 2026-03-11 20:43 by ms629
[考研] 289求调剂 +4 步川酷紫123 2026-03-11 4/200 2026-03-11 19:41 by peike
[考研] 材料工程330分求调剂，一志愿985 +5 小材化本科 2026-03-07 5/250 2026-03-11 16:51 by 535743368
[考研] 0857环境调剂 +5 熠熠_11 2026-03-10 5/250 2026-03-11 10:59 by wang_dand
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 0856材料与化工353分求调剂 +11 NIFFFfff 2026-03-09 11/550 2026-03-10 18:36 by suyuanhai
[考研] 材料工程专硕调剂自荐信，初试323 +6 李白26 2026-03-07 6/300 2026-03-10 16:16 by 无际的草原
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
[考研] 0703化学求调剂 +4 很老实人 2026-03-09 4/200 2026-03-09 13:38 by macy2011
[考研] 0856求调剂 +3 squirtle11 2026-03-07 3/150 2026-03-09 09:54 by @飒飒飒飒
[考研] 求0856调剂 +5 小力气珂珂 2026-03-08 5/250 2026-03-09 06:42 by houyaoxu
[考研] 求调剂推荐 +4 微辣不吃 2026-03-06 4/200 2026-03-07 00:28 by leaiy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭