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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 目的基因连接T载体 菌落pcr没有目的条带
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三只0小猪仔

新虫 (初入文坛)

[求助] 目的基因连接T载体 菌落pcr没有目的条带 已有3人参与

我PCR产物连接T载体，做蓝白斑筛选，都是白斑，挑但菌落，做菌落pcr，没有目的条带，难道都是假阳性吗？我菌落pcr引物跟目的基因一样 求指教

@飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2019-06-02 15:26:23
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三只0小猪仔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by A913162220 at 2019-06-03 16:28:52
这种小实验，多挑几个点就行，用M13F和R引物PCR

所以是菌落pcr引物不行吗？ 那我重新合成一条再试试？

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10楼2019-06-03 20:06:52
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花鸟画夜

新虫 (初入文坛)
是假阳性

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2楼2019-06-02 15:51:44
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眺望爱

铜虫 (初入文坛)
你的pcr引物跟目的基因一样是无法从pcr来断定是否为假阳性的，推荐用载体上的插入位点前后一段200-300bp的基因做引物，这样可以判断是否为假阳性。然后蓝白斑筛选其实有一些感受态有表达缺陷，比如说jm110,在加了显色剂的平板上也不显色的。

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目标：生物的星辰大海！！！！
3楼2019-06-02 18:33:35
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三只0小猪仔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 眺望爱 at 2019-06-02 18:33:35
你的pcr引物跟目的基因一样是无法从pcr来断定是否为假阳性的，推荐用载体上的插入位点前后一段200-300bp的基因做引物，这样可以判断是否为假阳性。然后蓝白斑筛选其实有一些感受态有表达缺陷，比如说jm110,在加了显 ...

那我要重新设计引物吗？还是多挑几个菌试一试，是PCR没有P出来吗？还是根本就没有连接上？

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4楼2019-06-03 07:31:58
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