24小时热门版块排行榜    

查看: 3228  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

杨锡369

新虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒导入农杆菌,菌落PCR假阳性该怎么处理 已有1人参与

我把重组好的质粒从大肠杆菌DH5α中抽提出来(重组质粒测序鉴定目的基因已经放进去了的),然后把抽提的质粒导入农杆菌感受态,在kan50抗性平板上28℃培养两天,挑单菌落做菌落PCR,怎么都P不出来。
请问各位小木虫遇到这种情况该怎么处理?怎么才能提升阳性率,降低假阳性?@gyesang
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhz0809

新虫 (初入文坛)

1.建议涂板50ug/ml Kan+50ug/ml Rif(GV3101 EHA105 AHL1 LBA4404,其它农杆菌按说明书添加)  单独的Kan 会长少量杂菌(我们的经验全涂<10个斑),如果你的板子长了接近1000个,肯定是转进去了
2.农杆菌菌落PCR不容易做,可以尝试质粒小提10ml菌液再做PCR   或者做35个循环,选用好的PCRMIX

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2019-05-17 10:25:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

freehomefc

新虫 (小有名气)

你的抗生素用错了。你用的抗生素应该是农杆菌加重组载体的抗性,而不只是重组载体的抗性

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2019-05-16 13:05:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨锡369

新虫 (小有名气)

送红花一朵
杨锡369: 回帖置顶 2019-05-16 13:33:27
引用回帖:
2楼: Originally posted by freehomefc at 2019-05-16 13:05:11
你的抗生素用错了。你用的抗生素应该是农杆菌加重组载体的抗性,而不只是重组载体的抗性

有较高转化率的重组质粒导入农杆菌的转化方法推荐吗?
3楼2019-05-16 13:08:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨锡369

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by freehomefc at 2019-05-16 13:05:11
你的抗生素用错了。你用的抗生素应该是农杆菌加重组载体的抗性,而不只是重组载体的抗性

为什么单抗不行,而要用双抗生素呢
4楼2019-05-16 13:13:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
信息提示
请填处理意见