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杨锡369

新虫 (小有名气)

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[求助] 重组质粒导入农杆菌，菌落PCR假阳性该怎么处理已有1人参与

我把重组好的质粒从大肠杆菌DH5α中抽提出来（重组质粒测序鉴定目的基因已经放进去了的），然后把抽提的质粒导入农杆菌感受态，在kan50抗性平板上28℃培养两天，挑单菌落做菌落PCR，怎么都P不出来。
请问各位小木虫遇到这种情况该怎么处理？怎么才能提升阳性率，降低假阳性？@gyesang

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1楼 2019-05-16 12:48:49

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杨锡369

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引用回帖:

9楼: Originally posted by zhz0809 at 2019-05-17 10:25:16
1.建议涂板50ug/ml Kan+50ug/ml Rif(GV3101 EHA105 AHL1 LBA4404，其它农杆菌按说明书添加) 单独的Kan 会长少量杂菌（我们的经验全涂<10个斑），如果你的板子长了接近1000个，肯定是转进去了
2.农杆菌菌落 ...

换了一个PCR酶，果然P出来了！

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