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YY向前走

新虫 (初入文坛)

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[交流] 微量细胞提取RNA，trizol保存，如何合并提取

我有个问题请教一下提取方面专家：

细胞数量是10^4数量级，每管是500ul左右透明的trizol保存，提取的时候觉得提取的RNA量达不到建库要求（按照每个细胞10pg的RNA量算，10^4级别细胞含的RNA达不到1ug建库起始量），所以将多达12管合并提取。

提取的时候我把trizol转管了，用康为试剂盒，加氯仿吸上清加等体积70%乙醇，过柱子提取。检测结果总量达不到100ng。

请教各位虫友，哪里做错了吗？

我知道每一步都有核酸损失，那是不是因为损失的量达到了2微克，所以提取失败？

有没有很好的解决这种问题的方案呢？？？

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1楼 2019-05-15 11:44:04

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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

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★
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通常Trizol和全血样本的比例是1:1，也可以稍多加一些Trizol，少加些血。混匀之后放置10分钟左右，直接加三氯甲烷混匀再去离心，可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷。我们实验室用BIODAI离心技术提取RNA比Trizol要简便些,楼主需要注意如果用Trizol每个步骤操作要快，用的时间药短些，防止RNA降解,异丙醇沉淀的时候，放-20°C的冰箱半个小时，或再适当延长一点时间。