24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2232  |  回复: 6

YY向前走

新虫 (初入文坛)

[交流] 微量细胞提取RNA,trizol保存,如何合并提取

我有个问题请教一下提取方面专家:

细胞数量是10^4数量级,每管是500ul左右透明的trizol保存,提取的时候觉得提取的RNA量达不到建库要求(按照每个细胞10pg的RNA量算,10^4级别细胞含的RNA达不到1ug建库起始量),所以将多达12管合并提取。

提取的时候我把trizol转管了,用康为试剂盒,加氯仿吸上清加等体积70%乙醇,过柱子提取。检测结果总量达不到100ng。

请教各位虫友,哪里做错了吗?

我知道每一步都有核酸损失,那是不是因为损失的量达到了2微克,所以提取失败?

有没有很好的解决这种问题的方案呢???
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84213507

捐助贵宾 (初入文坛)

实验室二愣子

细胞为啥用氯仿,我喜欢用试剂盒,提的纯度也高,丢失的也少
十点半实验室专业二愣子
2楼2019-05-15 12:04:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84213507

捐助贵宾 (初入文坛)

实验室二愣子


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
Roche试剂盒挺好用的
十点半实验室专业二愣子
3楼2019-05-15 12:08:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

YY向前走

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 84213507 at 2019-05-15 12:04:49
细胞为啥用氯仿,我喜欢用试剂盒,提的纯度也高,丢失的也少

细胞+trizol,送到我手中就是加完TRIZOL的样本,我只能这么做
4楼2019-05-15 14:32:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

YY向前走

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 84213507 at 2019-05-15 12:08:20
Roche试剂盒挺好用的

在我手里还有QIAGEN的盒子,我选了康为的盒子。。
5楼2019-05-15 14:33:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖仅楼主可见
6楼2019-07-24 11:00:52
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
通常Trizol和全血样本的比例是1:1,也可以稍多加一些Trizol,少加些血。混匀之后放置10分钟左右,直接加三氯甲烷混匀再去离心,可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷。我们实验室用BIODAI离心技术提取RNA比Trizol要简便些,楼主需要注意如果用Trizol每个步骤操作要快,用的时间药短些,防止RNA降解,异丙醇沉淀的时候,放-20°C的冰箱半个小时,或再适当延长一点时间。
7楼2019-10-14 15:07:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 YY向前走 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上本子正文33页,违规吗?会被低分嘛? +11 1234567wang 2026-05-17 13/650 2026-05-20 18:55 by tanfancy
[基金申请] 评审有感 +14 popular289 2026-05-18 23/1150 2026-05-20 17:39 by lincyb
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +6 fummck 2026-05-20 6/300 2026-05-20 17:29 by 姜太公烤鱼
[论文投稿] Sci. Bull. 悲剧经验 +6 jyang1999 2026-05-16 7/350 2026-05-20 16:39 by feng6531
[基金申请] 国自然评分 +3 无名者登山 2026-05-20 4/200 2026-05-20 13:29 by vito刘
[有机交流] 反应很差,大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 6/300 2026-05-20 10:36 by xtlilibin
[考博] 如果工作了想读博,可以边工作边读全日制嘛? 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[有机交流] 如何实现卤原子转化 +3 BT20230424 2026-05-15 8/400 2026-05-20 09:32 by xtlilibin
[基金申请] 河北省自然科学基金 +3 Peterchao 2026-05-18 3/150 2026-05-20 08:57 by 霸_霸
[教师之家] 上海大学实验技术岗位非升即走 +12 嘻嘻哈哈乐呵呵 2026-05-15 13/650 2026-05-20 08:34 by xli1984
[文学芳草园] 献血感触 +6 呀呀好傻 2026-05-19 11/550 2026-05-19 22:26 by 而立得乐
[考博] 云南大学材料与能源学院解琳课题组钙钛矿博士招生 +3 光伏爱好者 2026-05-17 5/250 2026-05-19 19:13 by 光伏爱好者
[基金申请] 2026山东省优青 +3 luckinging 2026-05-14 4/200 2026-05-19 16:15 by 52wls
[基金申请] 别被青基扩招骗了!26年科研内卷才刚刚开始 +3 国自然国社科中 2026-05-14 4/200 2026-05-19 08:48 by archvillain
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[基金申请] 国自然上会要求 +5 无名者登山 2026-05-18 9/450 2026-05-18 17:50 by BlakeReary
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
[文学芳草园] 半夜喝咖啡 +3 myrtle 2026-05-15 5/250 2026-05-18 01:03 by 小沈2018
[考博] 光量子物理方向 博士招生 1人(2026.09) +3 sandyworld 2026-05-15 4/200 2026-05-17 14:38 by sandyworld
[硕博家园] 申请博士 +3 呃?呃 2026-05-15 3/150 2026-05-16 11:01 by a4742549
信息提示
请填处理意见