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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 紧急内参问题求解
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田鼠117

银虫 (小有名气)

[交流] 紧急内参问题求解

最近实验中,根据文献采用了human β-actin gene的引物, 上游为: 5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’, 下游为: 5’-CTCCTTAATG TCACGCACGATTTC-3’ .我自己查了PUBMED后,得出PCR结果应为1091bp,RT-PCR为538bp.但是在具体实验中却发现PCR与RT结果均为538bp.但同条件下所做的human β-globin gene显示存在差异,表明应该是PCR与RT-PCR结果.麻烦各位高手给分析下问题所在,非常感谢.我的结果如图,第一个是PCR，第二个为RT-PCR

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-17 at 17:26 ]
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1楼 2009-05-20 08:42:15
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
是不是污染了？你的模板cdna里边混有dna或者rt的不够彻底？建议设计引物在UTR端和polyA端，这样可以避免这种情况
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会当凌绝顶，一览众山小
4楼2009-05-20 14:38:24
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amilie030312

金虫 (正式写手)
没看懂啥意思，是说你用RNA做模板做rt-pcr，再用DNA做模板做PCR，用的是同一对引物，但是两外显子中间有内含子所以rt-pcr和PCR的结果片段上有长度差异，但是现在两结果长度扩出来的一样，是这个意思吗？
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2楼2009-05-20 10:20:05
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田鼠117

银虫 (小有名气)
是的，是这个意思，你能帮我看看是怎么回事吗？谢谢
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3楼2009-05-20 10:34:08
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田鼠117

银虫 (小有名气)
我也怀疑过是污染，但是我的RT结果是正确的，反而是PCR结果不正确。
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5楼2009-05-20 20:58:37
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