应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 紧急内参问题求解
111/2返回列表12下一页
查看: 774  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

田鼠117

银虫 (小有名气)

[交流] 紧急内参问题求解

最近实验中,根据文献采用了human β-actin gene的引物, 上游为: 5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’, 下游为: 5’-CTCCTTAATG TCACGCACGATTTC-3’ .我自己查了PUBMED后,得出PCR结果应为1091bp,RT-PCR为538bp.但是在具体实验中却发现PCR与RT结果均为538bp.但同条件下所做的human β-globin gene显示存在差异,表明应该是PCR与RT-PCR结果.麻烦各位高手给分析下问题所在,非常感谢.我的结果如图,第一个是PCR，第二个为RT-PCR

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-17 at 17:26 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-05-20 08:42:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
没看懂啥意思，是说你用RNA做模板做rt-pcr，再用DNA做模板做PCR，用的是同一对引物，但是两外显子中间有内含子所以rt-pcr和PCR的结果片段上有长度差异，但是现在两结果长度扩出来的一样，是这个意思吗？
赞一下 回复此楼
2楼2009-05-20 10:20:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

田鼠117

银虫 (小有名气)
是的，是这个意思，你能帮我看看是怎么回事吗？谢谢
赞一下 回复此楼
3楼2009-05-20 10:34:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
是不是污染了？你的模板cdna里边混有dna或者rt的不够彻底？建议设计引物在UTR端和polyA端，这样可以避免这种情况
赞一下 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
4楼2009-05-20 14:38:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

田鼠117

银虫 (小有名气)
我也怀疑过是污染，但是我的RT结果是正确的，反而是PCR结果不正确。
赞一下 回复此楼
5楼2009-05-20 20:58:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

田鼠117

银虫 (小有名气)
没有人可以解释吗？万分着急了！
赞一下 回复此楼
6楼2009-05-21 08:11:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
呵呵，内含子不见啦
赞一下 回复此楼
7楼2009-05-21 10:01:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

田鼠117

银虫 (小有名气)
为什么会出现这种情况呢？会吗？
赞一下 回复此楼
8楼2009-05-21 10:09:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yoyocan

金虫 (正式写手)
你的目的 基因 这么小  本身没有内含子也是很正常的啊
赞一下 回复此楼
9楼2009-05-21 10:29:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
LZ还是先到NCBI上去确认一下你要做的那个物种的序列是否不要做的那部分是含有内含子的吧，片段内如果没有内含子只有外显子的话那从RNA做RT-PCR和从DNA做PCR得到的片段长度一样是完全正常的结果，如果你直接从RNA做PCR还能扩增出片段那只能说明你抽提的RNA里面有DNA的污染了。
赞一下 回复此楼
10楼2009-05-21 10:48:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 田鼠117 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭