24小时热门版块排行榜    

查看: 2303  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Misterboy

铁虫 (正式写手)

[求助] overlap PCR 已有2人参与

有一个大约10kb的片段,分成两段,用PCR扩增出来了,且两片段之间有25BP的同源臂,现在用overlap PCR一直扩不出目的片段,出现了非特异型扩增,primer用的还是原来的,一个片段的上游引物,一个片段的下游引物,延伸时间增加了一倍,但一直做不出来,各位有为有好一点的建议?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Misterboy

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 眺望爱 at 2019-05-30 16:57:28
10kb很大了,这个延伸应该要很久吧,你可以把overlap搞长一点啊,比如如果总共两百条编号引物,1-100扩一个,97或者99-200扩一个,这样overlap不就够长了嘛,overlap很重要的,重组还是扩增,短了就没法成功。
...

感谢,说的很在理,回头我试试

发自小木虫IOS客户端
8楼2019-05-30 23:42:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

qingai0128

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-05-10 17:53:39
没有细节,怎么判断? 引起非特异性扩增的原因有很多,Mg2+浓度过高、退火温度太低、引物特异性不好等等原因
至少要把细节贴出来。
从此以后309了
2楼2019-05-09 10:19:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

KM石头

金虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-05-10 17:53:52
建议先不加引物,其他正常加,进行10个循环,待温度下降,再加上引物进行30个循环

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2019-05-09 22:38:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

KM石头

金虫 (正式写手)

你可以尝试一下,我都是这样做的,都是成功的

发自小木虫Android客户端
4楼2019-05-09 22:40:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 334求调剂 +7 Trying] 2026-03-06 7/350 2026-03-08 03:55 by lfhuang
[考研] 0703化学求调剂学校 +3 一志愿京区211 2026-03-04 3/150 2026-03-07 21:35 by yinhuanshun
[考研] 一志愿中国石油大学(华东) 本科齐鲁工业大学 求调剂 +3 snw石 2026-03-07 3/150 2026-03-07 20:01 by houyaoxu
[考研] 278求调剂 +5 Gale1314 2026-03-06 5/250 2026-03-07 14:41 by 2735147993
[考研] 273求调剂 +5 星星111222 2026-03-02 7/350 2026-03-06 20:17 by 星星111222
[考研] 0856材料与化工求调剂! +5 化工考生111 2026-03-04 11/550 2026-03-06 01:20 by 化工考生111
[考研] 材料考研339求调剂 +3 Karry*^_^* 2026-03-04 3/150 2026-03-06 00:32 by wutongshun
[考研] 301求调剂 +4 李LJR 2026-03-04 4/200 2026-03-05 13:31 by Iveryant
[考研] 一志愿东北大学080500,英一数二343分求调剂 +5 Seele_v5 2026-03-04 5/250 2026-03-05 13:26 by Iveryant
[考研] 281电子信息求调剂 +5 jhtfeybgj 2026-03-02 9/450 2026-03-05 09:36 by 085400调剂党
[考研] 材料328求调剂 +10 一个萝卜02 2026-03-03 10/500 2026-03-05 09:31 by oxidpl
[考研] 材料复试调剂 +7 学材料的点 2026-03-01 8/400 2026-03-04 21:08 by wutongshun
[考研] 一志愿郑州大学,学硕,物理化学, 333求调剂 +5 李魔女斗篷 2026-03-04 5/250 2026-03-04 18:33 by houyaoxu
[考研] 0855机械工程324求调剂 +3 郑SK 2026-03-02 7/350 2026-03-04 17:24 by congmingdou
[考研] 281求调剂 +3 我是小小葱葱 2026-03-03 5/250 2026-03-04 14:23 by kakakapanpan
[考研] 0703化学学硕 288分 +4 旅行中的紫葡萄 2026-03-03 4/200 2026-03-03 23:41 by ch1979
[考研] 计算机学硕 分数285求调剂 +4 glwshine 2026-03-02 5/250 2026-03-03 14:27 by king呀
[考研] 307求调剂 +6 wyyyqx 2026-03-01 6/300 2026-03-03 09:24 by 2235787770
[考研] 288求调剂 +3 少71.8 2026-03-02 5/250 2026-03-03 06:01 by tgxtgxtgx9
[考研] 一志愿东北大学材料专硕328,求调剂 +3 shs1083 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:27 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见