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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 【求助】双缩脲法测定多肽含量的酸碱性调节问题
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ljf2608

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】双缩脲法测定多肽含量的酸碱性调节问题

刚刚解决了标曲的问题，又遇到了困难，希望虫虫们伸出援助之手：
  在测多肽的时候，首先用三氯乙酸与待测液以1：1的比例混合，将其中的蛋白质沉淀，然后加入双缩脲试剂，但是双缩脲反应要求在碱性条件下才能显示，想请教一下虫子们：除了直接调pH值以外， 还有什么好方法？并且我的浓度比较低，即使冷冻干燥之提高浓度，还是需要调pH值。看了一篇文献，他是测蛋白质呢，是用三氯乙酸沉淀之后，测定沉淀中蛋白质的含量，他是先将沉淀用乙醇洗，再加入四氯化碳，不知道四氯化碳起到了什么作用，希望虫虫们帮帮我。

[ Last edited by sugl on 2009-5-19 at 08:34 ]
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加油！努力！
1楼 2009-05-18 17:52:47
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ice0205

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也想用双缩脲来测多肽，问题也很多，你的标曲问题我也搞不定，在你的另外一个帖子上向你请教了，那请问你调ph值是用什么调的，调到几啊？效果怎么样？
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4楼2009-07-09 10:24:12
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cljoklh

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
ljf2608(金币+1,VIP+0): 5-18 22:25
ljf2608(金币+1,VIP+0): 5-18 22:25
ljf2608(金币+1,VIP+0):感谢你 5-18 22:26
ljf2608(金币+1,VIP+0): 5-18 22:26
ljf2608(金币+1,VIP+0): 5-19 13:18
ljf2608(金币+1,VIP+0): 5-19 13:19
双缩脲试剂本身就可以配成碱性，提供碱性条件：
双缩脲的配制：1.50gCuSO4•5H2O，6g四水合酒石酸钾钠，用500mL蒸馏水溶解，在搅拌的情况下加入300mL 10%的NaOH，定容到1000mL（加入1g KI防止Cu2+自动还原生成Cu+），贮存于塑料瓶中，避光保存。
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2楼2009-05-18 18:29:01
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ljf2608

金虫 (正式写手)
是啊！楼上的说得很对!但是在利用三氯乙酸沉淀蛋白质的时候，上清液和三氯乙酸的比例是1：1，这样，双缩脲的碱性是很难以抵消三氯乙酸的强酸性的！我用pH试纸试过了，将近1的酸性！不过后来我还是用调pH 的方法做了。但是发现颜色不是紫红色，可能还与菜籽粕的背景颜色有关系吧！希望虫虫们能给出更多的意见！谢谢！
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加油！努力！
3楼2009-05-18 22:25:29
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ljf2608

金虫 (正式写手)
你不要调PH值了，那样很麻烦，你可以调整一下双缩脲试剂和样品的比值，文献都说4：6，但是那样根本不行，你得调整这个比例，这样就不用调pH了
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加油！努力！
5楼2009-07-09 19:41:48
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