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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 蓝白斑筛选出现非菌落的蓝色东西
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不完美的m

新虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白斑筛选出现非菌落的蓝色东西

本人小白，请教一下各位大神，最近在做分子克隆。在进行蓝白斑筛选的时候平板上出现了很小很小的蓝色的东西，白色的一个都没有，我想问下，那个蓝色的是什么东西？为什么会出现这种情况呢？注：1、我所克隆的分子片段2500左右，PCR产物回收后跑胶验证条带正常。2、按照PCR的体系（没有加引物，使用Taq DNApoly酶，没有dATP，用的dNTP代替的），72℃，反应10min。加A尾巴。之前也是这么做的。3、接着做连接（使用T-Vector。DH5a。按照标准操作进行的).涂板第二天出现蓝色东西，感觉菌落一个都没有长出来。不知道是什么东西，更不知道什么原因。求教！
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1楼 2019-04-20 20:02:56
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请教各位

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by KM石头 at 2019-05-23 21:31:06
有专门的A尾添加试剂盒
...

什么情况需要加尾，平时用extaq酶，需要加尾吗？链接pm18载体

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7楼2019-05-24 00:25:40
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f?h?j?nv?h

新虫 (小有名气)
我的都是蓝斑。也不知道为什么

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2楼2019-05-17 09:13:05
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请教各位

新虫 (小有名气)
请问如何加A尾

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3楼2019-05-23 10:25:37
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黑暗微光

新虫 (初入文坛)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-25 22:49:30
我最近也在做蓝白斑筛选，一般蓝斑表示非重组载体而白斑才是我们要的，白色的菌没有，可能是连接试剂盒有问题，用连接试剂盒给的那个DNA去试一下，看有没有白色菌落，如果有，说明你的模板有问题，如果没有白色菌落，那就是你的试剂盒有问题。

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4楼2019-05-23 10:50:38
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