| 查看: 2819 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
不完美的m新虫 (初入文坛)
|
[求助]
蓝白斑筛选出现非菌落的蓝色东西
|
|
| 本人小白，请教一下各位大神，最近在做分子克隆。在进行蓝白斑筛选的时候平板上出现了很小很小的蓝色的东西，白色的一个都没有，我想问下，那个蓝色的是什么东西？为什么会出现这种情况呢？注：1、我所克隆的分子片段2500左右，PCR产物回收后跑胶验证条带正常。2、按照PCR的体系（没有加引物，使用Taq DNApoly酶，没有dATP，用的dNTP代替的），72℃，反应10min。加A尾巴。之前也是这么做的。3、接着做连接（使用T-Vector。DH5a。按照标准操作进行的).涂板第二天出现蓝色东西，感觉菌落一个都没有长出来。不知道是什么东西，更不知道什么原因。求教！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有87人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
3楼2019-05-23 10:25:37
f?h?j?nv?h
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1036.4
- 散金: 27
- 红花: 1
- 帖子: 242
- 在线: 2.4小时
- 虫号: 10392260
- 注册: 2018-09-21
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
2楼2019-05-17 09:13:05
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-25 22:49:30
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-25 22:49:30
|
我最近也在做蓝白斑筛选，一般蓝斑表示非重组载体而白斑才是我们要的，白色的菌没有，可能是连接试剂盒有问题，用连接试剂盒给的那个DNA去试一下，看有没有白色菌落，如果有，说明你的模板有问题，如果没有白色菌落，那就是你的试剂盒有问题。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2019-05-23 10:50:38
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-25 22:49:45
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-25 22:49:45
|
补充下，就算是白色的，也不一定就是你想要的，可能有小片段的DNA也插入到了载体上，破坏了那个β-半乳糖苷酶的阅读框架，导致菌落呈现白色菌落。 而有时候蓝色菌进行快速pcr检测的时候，同样也可以p出来，可能是前段插入了，但是没有破坏阅读框架 发自小木虫Android客户端 |
5楼2019-05-23 10:54:30
