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不完美的m新虫 (初入文坛)
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[求助]
蓝白斑筛选出现非菌落的蓝色东西
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| 本人小白，请教一下各位大神，最近在做分子克隆。在进行蓝白斑筛选的时候平板上出现了很小很小的蓝色的东西，白色的一个都没有，我想问下，那个蓝色的是什么东西？为什么会出现这种情况呢？注：1、我所克隆的分子片段2500左右，PCR产物回收后跑胶验证条带正常。2、按照PCR的体系（没有加引物，使用Taq DNApoly酶，没有dATP，用的dNTP代替的），72℃，反应10min。加A尾巴。之前也是这么做的。3、接着做连接（使用T-Vector。DH5a。按照标准操作进行的).涂板第二天出现蓝色东西，感觉菌落一个都没有长出来。不知道是什么东西，更不知道什么原因。求教！ |
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-25 22:49:45
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-25 22:49:45
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补充下，就算是白色的，也不一定就是你想要的，可能有小片段的DNA也插入到了载体上，破坏了那个β-半乳糖苷酶的阅读框架，导致菌落呈现白色菌落。 而有时候蓝色菌进行快速pcr检测的时候，同样也可以p出来，可能是前段插入了，但是没有破坏阅读框架 发自小木虫Android客户端 |
5楼2019-05-23 10:54:30
f?h?j?nv?h
新虫 (小有名气)
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2楼2019-05-17 09:13:05
3楼2019-05-23 10:25:37
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-25 22:49:30
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-25 22:49:30
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我最近也在做蓝白斑筛选，一般蓝斑表示非重组载体而白斑才是我们要的，白色的菌没有，可能是连接试剂盒有问题，用连接试剂盒给的那个DNA去试一下，看有没有白色菌落，如果有，说明你的模板有问题，如果没有白色菌落，那就是你的试剂盒有问题。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2019-05-23 10:50:38
