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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 纳米生物材料 » 【求助】细胞如何做TEM？
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luke1979

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】细胞如何做TEM？

本人制备了磁性纳米粒子，希望通过透射电子显微镜看它能否进到Hela细胞里面，纳米粒子和细胞培养两天后，我该如何处理之后，照TEM。
            诚心感谢各位虫友，请描述的具体一点，我不是学生物的，对细胞不太懂。谢谢！！！
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1楼 2009-05-18 10:12:25
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mr_songhua

★ ★
yusen_1982(金币+1,VIP+0):欢迎应助 5-18 11:11
luke1979(金币+1,VIP+0):谢谢，在北京哪能提供这样的仪器？ 5-18 20:29
这个要做切片的，你可以咨询下医学院里做电镜的老师，但是一般讲老师们不会给你做，怕崩了刀口，刀很贵，呵呵
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2楼2009-05-18 10:15:02
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lotus9

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
zhangwj(金币+2,VIP+0):谢谢 5-18 14:36
luke1979(金币+3,VIP+0):说明的太好了，谢谢，请问你知道在北京哪个学校或研究所能提供上面操作的仪器或工具么？ 5-18 20:28
细胞样品2.5%的戊二醛磷酸缓冲溶液固定24h，0.1M PBS溶液清洗3-4次， 1%锇酸后固定，PBS溶液清洗3-4次，然后经50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 100%丙酮逐级脱水。
脱水后的样品用618环氧树脂包埋。将包埋好的样品修整好，修块，切半薄片进行观察定位。再用金刚石刀切超薄切片，厚度约为75nm，置于镀有碳膜的铜网上。再分别经过30分钟1%醋酸铀和10分钟的柠檬酸铅双重染色，0.02M氢氧化钠溶液清洗15~20次后，双蒸水冲洗，滤纸吸干。用透射电镜进行观察。
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3楼2009-05-18 14:34:14
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lotus9

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
薰衣草儿(金币+1,VIP+0):谢谢回答，期待您的参与 5-18 21:55
luke1979(金币+2,VIP+0):谢谢 5-20 15:09
北京的话，清华大学崔福斋教授那有超薄切片机，但可能不对外。一般好一点的大学医学院病理科或电镜室肯定有的，你可以去问问，比如北京大学医学院。你可以委托他们做的，切细胞的超薄切片，不一定用金刚石刀，玻璃刀就够了，不会很贵。
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4楼2009-05-18 21:52:34
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小笨953

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
yusen_1982(金币+1,VIP+0):欢迎来生物材料版讨论 6-17 18:23
我也没做过，不过实验室师姐有做。我觉得最好是委托其他单位做，如果不需要做很多样的话，一般医学院能做细胞电镜吧。因为买四氧化锇染色剂就挺贵的，而且如果没人指导整个制备过程还是很繁琐的。
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如果每天工作十小时，那么生活会否有改变？
5楼2009-06-17 16:17:59
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