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玫瑰蔷薇月季新虫 (初入文坛)
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基因扩增 已有1人参与
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最近在克隆基因，以cDNA为模板来扩增基因，用普通的TAQ酶能够扩出来，但是条带不太亮，用takara的primerstart扩不出来，完全没有条带，求助各位大神这种情况应该怎么办？谢谢！ 发自小木虫Android客户端 |
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remax520
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【答案】应助回帖
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午饭这个问题，我会从如下几个方面考虑：1, cDNA是不是存在问题，需要电泳检测一下，如果是弥散的条带，说明反转录没有问题。2，引物设计问题，根据位点序列启动子和后续序列反复核对，是否需要互补等操作，某些碱基偏向但是问题不大，只要不行成特殊结构就好。3，利用扩增效率较好的rTaq进行扩增尝试。4，扩增条件，尤其是退火温度，可以根据引物合成时给定的Tm值进行释当调整进行扩增尝试。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2019-07-01 21:00:23
remax520
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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酶的扩增效率和保真性是不同的，Taq酶的保真性差，但是扩增效率还是很好的。有的酶保真性高，因此扩增效率就会低一点，如果对扩增产物没有太高的保真性能的要求，用Taq酶就可以了 发自小木虫Android客户端 |
2楼2019-04-17 20:09:21
3楼2019-07-01 20:43:58
