| 查看: 1015 | 回复: 3 | ||
玫瑰蔷薇月季新虫 (初入文坛)
|
[求助]
基因扩增 已有1人参与
|
|
最近在克隆基因，以cDNA为模板来扩增基因，用普通的TAQ酶能够扩出来，但是条带不太亮，用takara的primerstart扩不出来，完全没有条带，求助各位大神这种情况应该怎么办？谢谢！ 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
专利优先审查新办法出了，哪些成果值得走快速预审通道？
已经有33人回复
-
新审查指南堵死了"一案双申"的老路，实用新型和发明只能二选一了？
已经有27人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有225人回复
-
课题快结题了才发现没东西可申请专利？四个维度帮你挖一挖
已经有22人回复
-
论文投出去之前到底要不要先申请专利？被审稿周期坑过一次后的复盘
已经有8人回复
-
横向课题结题时企业突然问专利归谁，合同里没约定的话默认算谁的？
已经有22人回复
-
教师节聊点实在的：很多老师的专利正在悄悄失效
已经有21人回复
-
第一次独立答复专利审查意见，才发现这活跟毕业答辩是一个套路
已经有24人回复
-
使用QE质谱仪检测杂质含量
已经有0人回复
-
帮学院整理搁置专利清单时发现一半快到年费期，聊聊几条盘活的路子
已经有18人回复
remax520
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 7365.5
- 散金: 5
- 红花: 15
- 帖子: 1104
- 在线: 88.6小时
- 虫号: 987829
- 注册: 2010-04-02
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
酶的扩增效率和保真性是不同的，Taq酶的保真性差，但是扩增效率还是很好的。有的酶保真性高，因此扩增效率就会低一点，如果对扩增产物没有太高的保真性能的要求，用Taq酶就可以了 发自小木虫Android客户端 |
2楼2019-04-17 20:09:21
3楼2019-07-01 20:43:58
remax520
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 7365.5
- 散金: 5
- 红花: 15
- 帖子: 1104
- 在线: 88.6小时
- 虫号: 987829
- 注册: 2010-04-02
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
【答案】应助回帖
|
午饭这个问题，我会从如下几个方面考虑：1, cDNA是不是存在问题，需要电泳检测一下，如果是弥散的条带，说明反转录没有问题。2，引物设计问题，根据位点序列启动子和后续序列反复核对，是否需要互补等操作，某些碱基偏向但是问题不大，只要不行成特殊结构就好。3，利用扩增效率较好的rTaq进行扩增尝试。4，扩增条件，尤其是退火温度，可以根据引物合成时给定的Tm值进行释当调整进行扩增尝试。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2019-07-01 21:00:23
20