| 查看: 847 | 回复: 3 | ||
玫瑰蔷薇月季新虫 (初入文坛)
|
[求助]
基因扩增已有1人参与
|
|
最近在克隆基因，以cDNA为模板来扩增基因，用普通的TAQ酶能够扩出来，但是条带不太亮，用takara的primerstart扩不出来，完全没有条带，求助各位大神这种情况应该怎么办？谢谢！ 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
怎么查看固定段11位
已经有5人回复
-
可以准确的通过filecode判断基金中还是不中。
已经有15人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有58人回复
-
感觉普通人已经没办法玩了，躺平是唯一的出路。
已经有26人回复
-
江苏省优青门槛
已经有20人回复
-
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了
已经有10人回复
-
面上项目计划书
已经有7人回复
-
面上项目计划书附件
已经有9人回复
-
面上项目计划书系统状态
已经有18人回复
-
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目
已经有33人回复
-
和伊朗人合作
已经有32人回复
remax520
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 7365.5
- 散金: 5
- 红花: 15
- 帖子: 1104
- 在线: 88.6小时
- 虫号: 987829
- 注册: 2010-04-02
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
酶的扩增效率和保真性是不同的，Taq酶的保真性差，但是扩增效率还是很好的。有的酶保真性高，因此扩增效率就会低一点，如果对扩增产物没有太高的保真性能的要求，用Taq酶就可以了 发自小木虫Android客户端 |
2楼2019-04-17 20:09:21
3楼2019-07-01 20:43:58
remax520
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 7365.5
- 散金: 5
- 红花: 15
- 帖子: 1104
- 在线: 88.6小时
- 虫号: 987829
- 注册: 2010-04-02
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
【答案】应助回帖
|
午饭这个问题，我会从如下几个方面考虑：1, cDNA是不是存在问题，需要电泳检测一下，如果是弥散的条带，说明反转录没有问题。2，引物设计问题，根据位点序列启动子和后续序列反复核对，是否需要互补等操作，某些碱基偏向但是问题不大，只要不行成特殊结构就好。3，利用扩增效率较好的rTaq进行扩增尝试。4，扩增条件，尤其是退火温度，可以根据引物合成时给定的Tm值进行释当调整进行扩增尝试。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2019-07-01 21:00:23