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接合转化做基因敲除遇到问题
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| 我最近在做基因敲除，野生菌为鞘氨醇菌，克隆了目标基因上下游序列，中间加入卡那抗性基因，构建到了pEX8Tc载体上，之后转入到了SM10 λpir中与野生菌双亲接合转化，在LB平板上过夜结合后，涂布到了Km，Sm双抗平板上，结果长出许多菌落，之后划线到15%蔗糖LB平板也能生长，但是验证了长的菌株是SM10 λpir，并不是野生菌。在此之前已验证过野生菌是抗Sm，不抗的Km，并且可以在15%蔗糖LB平板生长；SM10 λpir（pEX8Tc）抗Km，不抗Sm，不能在15%蔗糖LB平板生长。接合之后怎么会出现这种情况了呢，希望哪位大神能帮忙解答一下，不胜感激！！！ |
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