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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 接合转化做基因敲除遇到问题
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haishujy

金虫 (初入文坛)

[求助] 接合转化做基因敲除遇到问题

我最近在做基因敲除，野生菌为鞘氨醇菌，克隆了目标基因上下游序列，中间加入卡那抗性基因，构建到了pEX8Tc载体上，之后转入到了SM10 λpir中与野生菌双亲接合转化，在LB平板上过夜结合后，涂布到了Km，Sm双抗平板上，结果长出许多菌落，之后划线到15%蔗糖LB平板也能生长，但是验证了长的菌株是SM10 λpir，并不是野生菌。在此之前已验证过野生菌是抗Sm，不抗的Km，并且可以在15%蔗糖LB平板生长；SM10 λpir（pEX8Tc）抗Km，不抗Sm，不能在15%蔗糖LB平板生长。接合之后怎么会出现这种情况了呢，希望哪位大神能帮忙解答一下，不胜感激！！！
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1楼 2019-03-31 15:21:49
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
这个菌做过基因敲除，直接自杀载体转进去敲除就能成功

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2楼2019-03-31 23:50:48
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haishujy

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2019-03-31 23:50:48
这个菌做过基因敲除，直接自杀载体转进去敲除就能成功

请问是用的电转吗，我试过多次了，涂到平板上不长 ，电击条件除了电压还有什么可以调整的吗，有什么需要特别注意的吗
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3楼2019-04-01 09:04:41
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