| 查看: 526 | 回复: 2 | |||
[交流]
连接转化始终不成功 已有1人参与
|
|
切胶回收后连接转化，就等成功后送去测序，然而检测后始终没有条带，请问什么原因呢？感受态应该没问题，板也没啥问题，重新做了好几次。 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有108人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
Esther_Young
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 142.1
- 红花: 2
- 帖子: 82
- 在线: 24.1小时
- 虫号: 3713611
- 注册: 2015-03-06
- 专业: 食品科学基础
2楼2019-03-31 15:31:18
Esther_Young
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 142.1
- 红花: 2
- 帖子: 82
- 在线: 24.1小时
- 虫号: 3713611
- 注册: 2015-03-06
- 专业: 食品科学基础
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
1. 目的基因你测序过了 所以应该没问题的；2.酶切问题，是不是没切开？我用的takara的快切酶 37度切2小时左右；电泳时未酶切的和酶切过的质粒一起跑，以判断质粒是不是切开了。3.回收 酶切回收后电泳检测下亮度，已决定连接时载体和目的片段的加入比例；4.连接 如果目的片段和载体亮度差不多 我一般就连接酶、buffer、载体片段各加1ul 目的片段加7ul takara的连接酶 16度连接12-16小时。5.转化时热激温度和时间严格按照感受态说明书来 我用的唯地的感受态 42度45s。6. 活化时间可适当延长 我一般37度活化1.5-2小时。祝好 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2019-03-31 15:37:19
