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连接转化始终不成功 已有1人参与
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切胶回收后连接转化，就等成功后送去测序，然而检测后始终没有条带，请问什么原因呢？感受态应该没问题，板也没啥问题，重新做了好几次。 发自小木虫Android客户端 |
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Esther_Young
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2楼2019-03-31 15:31:18
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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1. 目的基因你测序过了 所以应该没问题的；2.酶切问题，是不是没切开？我用的takara的快切酶 37度切2小时左右；电泳时未酶切的和酶切过的质粒一起跑，以判断质粒是不是切开了。3.回收 酶切回收后电泳检测下亮度，已决定连接时载体和目的片段的加入比例；4.连接 如果目的片段和载体亮度差不多 我一般就连接酶、buffer、载体片段各加1ul 目的片段加7ul takara的连接酶 16度连接12-16小时。5.转化时热激温度和时间严格按照感受态说明书来 我用的唯地的感受态 42度45s。6. 活化时间可适当延长 我一般37度活化1.5-2小时。祝好 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2019-03-31 15:37:19