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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 表达出来的蛋白大小正确有没有可能不是目的蛋白？
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tq0ax1r

新虫 (初入文坛)

[求助] 表达出来的蛋白大小正确有没有可能不是目的蛋白？ 已有2人参与

用大肠杆菌在M9 minimum media里用IPTG 诱导表达，加完IPTG即出现目标蛋白，SDSPAGE上大小和我们预期的一样。但是它死活不挂镍柱，N端有6个histag，试过加6M盐酸胍、6M尿素，变性条件纯化，以及和Ni2+ resin孵育过夜，传流上柱2次，仍然不挂柱。现在怀疑该蛋白是不是目的蛋白，打算做western。

但我还是想不通，这个蛋白大小和目的蛋白一样，加完IPTG后出现的，随着诱导时间的加长而增强，难道会不是目标蛋白？有没有人曾经碰到过这种情况？
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1楼 2019-03-30 11:08:55
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龙猫测

木虫 (文坛精英)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2019-04-05 08:14:39
上个图看看，做个 WB 确认一下
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2楼2019-03-30 17:29:53
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
试试purimag的Ni磁珠

发自小木虫IOS客户端
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3楼2019-04-01 14:10:42
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renjunr7raul

新虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2019-04-05 08:14:26
一切皆有可能。。用的柱子纯化别的蛋白好使吗
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4楼2019-04-02 10:01:29
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tq0ax1r

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by renjunr7raul at 2019-04-02 10:01:29
一切皆有可能。。用的柱子纯化别的蛋白好使吗

别的蛋白可以纯化。这个蛋白用了InVision Histag Stain检测Histag,条带很浅，难说有没有Histag
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5楼2019-04-05 07:03:23
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renjunr7raul

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by tq0ax1r at 2019-04-05 07:03:23
别的蛋白可以纯化。这个蛋白用了InVision Histag Stain检测Histag,条带很浅，难说有没有Histag...

his tag如果克隆设计正确的话一般都会有的，要么被蛋白酶切掉了（这个可能性较小），要么折叠的时候被包进去了识别不出来
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6楼2019-04-05 21:09:49
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