24小时热门版块排行榜    

查看: 301  |  回复: 4
当前主题已经存档。

sgba0307

铁虫 (小有名气)

[交流] 原核表达相关问题

我是刚刚开始做这方面的好多都不懂,麻烦各位帮忙看一下,谢谢!
实验过程:扩增目的基因--------------- 双酶切目的基因------- 回收酶切的目的基因----回收的目的基因与双酶切后的质粒载体相连接-------原核表达

我所用的质粒具有氨苄抗性,
在目的基因和质粒载体连接之后具体怎么样来筛选哪些是已经连接上的?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)


350784478(金币+1):谢谢提供,欢迎常来。
这个简单   把连接好的质粒提出来跑个电泳看大小(应该为质粒+目的基因的大小),大小合适了再用双酶切进一步检测(确保连接正确)。
2楼2009-05-14 15:37:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

临风7071

木虫 (正式写手)


350784478(金币+1):谢谢提供
在氨苄平板上筛选,如果你的载体上有i]LacZ并且多克隆位点在里面,那么你可以用氨苄+蓝白斑筛选重组子,挑白色的就是重组子了
3楼2009-05-14 16:16:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漫迹

金虫 (小有名气)


350784478(金币+1):谢谢提供,欢迎常来生物学板块
在氨苄平板上筛选,挑但菌落,快速提质粒,与载体做对照进行凝胶电泳,条带比载体带大的应该就是连上的了
4楼2009-05-14 16:24:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
350784478(金币+2):谢谢提供,欢迎常来生物学板块
1、提好的质粒直接拿去跑电泳是错误的,至少要用单酶切鉴定
2、蓝白斑筛选是可行的,但也有一定的限制性
3、测序是最准的,你可以选择跑个菌落PCR,有带的送测序
5楼2009-05-14 16:27:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sgba0307 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
请填处理意见