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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原核表达相关问题
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sgba0307

铁虫 (小有名气)

[交流] 原核表达相关问题

我是刚刚开始做这方面的好多都不懂，麻烦各位帮忙看一下，谢谢！
实验过程：扩增目的基因--------------- 双酶切目的基因------- 回收酶切的目的基因----回收的目的基因与双酶切后的质粒载体相连接-------原核表达

我所用的质粒具有氨苄抗性，
在目的基因和质粒载体连接之后具体怎么样来筛选哪些是已经连接上的？
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1楼 2009-05-14 13:48:56
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
★
350784478(金币+1):谢谢提供，欢迎常来。
这个简单   把连接好的质粒提出来跑个电泳看大小（应该为质粒+目的基因的大小），大小合适了再用双酶切进一步检测（确保连接正确）。
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2楼2009-05-14 15:37:50
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临风7071

木虫 (正式写手)
★
350784478(金币+1):谢谢提供
在氨苄平板上筛选，如果你的载体上有i]LacZ并且多克隆位点在里面，那么你可以用氨苄+蓝白斑筛选重组子，挑白色的就是重组子了
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3楼2009-05-14 16:16:00
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漫迹

金虫 (小有名气)
★
350784478(金币+1):谢谢提供，欢迎常来生物学板块
在氨苄平板上筛选，挑但菌落，快速提质粒，与载体做对照进行凝胶电泳，条带比载体带大的应该就是连上的了
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4楼2009-05-14 16:24:39
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
350784478(金币+2):谢谢提供，欢迎常来生物学板块
1、提好的质粒直接拿去跑电泳是错误的，至少要用单酶切鉴定
2、蓝白斑筛选是可行的，但也有一定的限制性
3、测序是最准的，你可以选择跑个菌落PCR，有带的送测序
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5楼2009-05-14 16:27:24
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