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furybeta

新虫 (初入文坛)


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菌液跑pcr几天了都有很多杂带
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和同学用的一样的大肠杆菌菌液

同学做的鉴定试验 都跑出了目的条带且成功

(所以感觉不是菌液的问题)

我做的耐药基因检测 每次都有很多杂带

用的引物是文献里找的 且他们都成功了 温度是结合了文献温度和建议温度(但他们都是用dna跑的pcr 我是用菌液跑的 mix用的不同)

菌液1微升 上下引物各1 mix12.5 ddH2o 9.5

pcr温度

98度 3min

98度 10s 55度 10s 72度 15s (30个循环)

72度 2min

10度 30min(保温)

(但文献前俩是94度 老师说这个没影响…)

老师让我优化实验

比如优化温度等 我提高了一点 还是不行

我在想我要不要做一个梯度pcr找出最适温度

还是说我的其他步骤有什么问题吗

求大神指导

好迷茫

菌液跑pcr几天了都有很多杂带


菌液跑pcr几天了都有很多杂带-1


菌液跑pcr几天了都有很多杂带-2


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jianghuqixia

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
换引物,文献引物不靠谱,你可以自己多设计几对,又没多少钱,提高引物的专一性

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7楼2019-03-30 14:47:41
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