应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助启动子构建载体问题
111/2返回列表12下一页
查看: 2251  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

di_chen

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助启动子构建载体问题 已有1人参与

求助大家！！！我目前在克隆启动子，好不容易P出了2600bp左右的条带，回收之后构建到PBI121和PAbAi载体上，重复做了不少于20次，都能长出菌斑，但是鉴定都没有阳性克隆。我检查了回收的片段产物，酶切产物都没有问题，也试过了不同的比例（片段产物/酶切产物），但还是没有用。但这是我的毕业课题，也不能一直拖着吧，然后找生物公司帮忙做，他们看了我的序列说是靠近CDS区域的序列AT含量太高，GC含量低，并且是构建到低拷贝载体上，不容易做，但他们做了半个月了，也没啥动静，简直是急死我了。。。。。现在不知道要咋办了，所以请大家帮我看一下，有什么办法解决没有。不胜感激！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-03-19 20:47:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小松鼠45

捐助贵宾 (正式写手)
换另一个启动子。全合成启动子序列。重新设计引物定位到GC含量正常的区间

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2019-03-20 00:41:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenpp2006

新虫 (正式写手)
试试同源重组

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

di_chen
3楼2019-03-20 05:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)
可以考虑丢给我做（站短我哦）。。嘿嘿。。
赞一下 回复此楼
4楼2019-03-20 11:21:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

di_chen

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenpp2006 at 2019-03-20 05:16:17
试试同源重组

谢谢，这个方法我试过了，但是鉴定的时候没有阳性克隆
赞一下 回复此楼
5楼2019-03-20 13:54:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

di_chen

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小松鼠45 at 2019-03-20 00:41:07
换另一个启动子。全合成启动子序列。重新设计引物定位到GC含量正常的区间

您好，您说的换是怎么换？我确实了要做那个基因，而且那段GC含量异常的序列刚好在CDS序列前面，并且有800bp左右，不能不要这一段吧。
赞一下 回复此楼
6楼2019-03-20 14:03:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buchongyang

铜虫 (小有名气)
楼主的目的片段和连接有没有问题？引物设计呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2019-03-20 23:06:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

di_chen

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by buchongyang at 2019-03-20 23:06:10
楼主的目的片段和连接有没有问题？引物设计呢？

我用的是同源重组的方法，直接用加有酶切位点的引物扩增目的片段，扩增的片段单一，大小差不多，应该没啥问题。只是有可能真的没有连接上。。。长出来的都是空载，但是我换了好几个比例，还是没有用
赞一下 回复此楼
8楼2019-03-21 09:34:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

好运连连OK

新虫 (小有名气)
实在连接不上也可以考虑用全基因合成的方式，把你的目的片段直接在载体上合成

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2019-03-21 12:24:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

di_chen

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 好运连连OK at 2019-03-21 12:24:20
实在连接不上也可以考虑用全基因合成的方式，把你的目的片段直接在载体上合成

谢谢，还能直接把片段合成在载体上啊，载体有10000多bp呢，我只知道合成基因
赞一下 回复此楼
10楼2019-03-21 13:44:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 di_chen 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 环境工程专硕307 一志愿211 四六级已过 求调剂 +5 ccc! 2026-03-03 6/300 2026-03-05 09:42 by 热情沙漠
[考研] 材料085600 303求调剂 +7 1bygone 2026-03-04 7/350 2026-03-05 09:39 by oxidpl
[考研] 304分材料专硕求调剂 +11 qiuzhigril 2026-03-03 14/700 2026-03-05 09:30 by vfdbghn
[考研] 材料085601一志愿哈工大317 +3 压迫感行 2026-03-04 3/150 2026-03-05 09:04 by 斩魂滴兔子！
[考研] 材料与化工，291分，求调剂 +9 咕噜咕噜123123 2026-03-04 11/550 2026-03-05 09:03 by 斩魂滴兔子！
[考研] 材料学硕080500复试调剂294 +3 四叶zjz 2026-03-04 3/150 2026-03-05 07:09 by kunm555
[考研] 求调剂 +7 博斯特525 2026-03-04 7/350 2026-03-04 18:09 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 +4 G212 2026-03-03 5/250 2026-03-04 09:34 by 每天只摆一小会
[考研] 291求调剂 +3 咕噜咕噜123123 2026-03-02 4/200 2026-03-04 08:39 by 每天只摆一小会
[论文投稿] EST拒稿重投 5+3 15102603076 2026-03-02 3/150 2026-03-04 00:51 by bobvan
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +5 Qwertyuop 2026-03-01 5/250 2026-03-03 17:50 by 梅子鸭鸭
[考研] 291求调剂 +3 MuoLuo1312 2026-03-02 6/300 2026-03-03 12:13 by 热情沙漠
[考研] 290分材料工程085601求调剂 数二英一 +8 llx0610 2026-03-02 9/450 2026-03-02 22:09 by 无际的草原
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +15 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 15/750 2026-03-02 20:13 by hypershenger
[考研] 一志愿华南理工大学材料与化工326分，求调剂 +3 wujinrui1 2026-02-28 3/150 2026-03-02 16:36 by chuocheng
[考研] 295求调剂 +8 19171856320 2026-02-28 8/400 2026-03-02 11:19 by yuchj
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭