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di_chen

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助启动子构建载体问题 已有1人参与

求助大家!!!我目前在克隆启动子,好不容易P出了2600bp左右的条带,回收之后构建到PBI121和PAbAi载体上,重复做了不少于20次,都能长出菌斑,但是鉴定都没有阳性克隆。我检查了回收的片段产物,酶切产物都没有问题,也试过了不同的比例(片段产物/酶切产物),但还是没有用。但这是我的毕业课题,也不能一直拖着吧,然后找生物公司帮忙做,他们看了我的序列说是靠近CDS区域的序列AT含量太高,GC含量低,并且是构建到低拷贝载体上,不容易做,但他们做了半个月了,也没啥动静,简直是急死我了。。。。。现在不知道要咋办了,所以请大家帮我看一下,有什么办法解决没有。不胜感激!!!
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chenpp2006

新虫 (正式写手)

试试同源重组

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2019-03-20 05:16:17
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小松鼠45

捐助贵宾 (正式写手)

换另一个启动子。全合成启动子序列。重新设计引物定位到GC含量正常的区间

发自小木虫Android客户端
2楼2019-03-20 00:41:07
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

可以考虑丢给我做(站短我哦)。。嘿嘿。。
4楼2019-03-20 11:21:04
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di_chen

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenpp2006 at 2019-03-20 05:16:17
试试同源重组

谢谢,这个方法我试过了,但是鉴定的时候没有阳性克隆
5楼2019-03-20 13:54:48
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