应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何检测蛋白在大肠杆菌中的不表达是因为mRNA的不稳定？
111/2返回列表12下一页
查看: 903  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

hongkaichen

金虫 (小有名气)

[交流] 如何检测蛋白在大肠杆菌中的不表达是因为mRNA的不稳定？

RT   如何检测蛋白在大肠杆菌中的不表达是因为mRNA的不稳定？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-05-09 19:57:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifefamily

★
hongkaichen(金币+1,VIP+0):谢谢回答，这是老师的一个作业，跟实验无关. 5-13 12:55
有怎么一说？
不表达的因素多了：
细胞毒性，N端信号肽，稀有密码子，等等。
你换GST或者Trx融合试过了么？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-05-13 10:23:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongkaichen

金虫 (小有名气)
这是老师的一个作业，思考题，跟实验无关，因为mRNA不稳定也可能造成蛋白不表达，所以如果是这种原因，就是让我们用什么方法验证是不是这种原因。开始我觉得可以用观察多聚核糖体现象来验证，但这种方法不能排除菌自身的蛋白表达也能产生这种现象。如果用RT-PCR  P出来了不知道能不能说有mRNA存在，然后排除掉这种原因？
赞一下 回复此楼
3楼2009-05-13 13:01:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifefamily

真的，我还第一次听说跟mRNA不稳定有关，孤陋寡闻了……
三、mRNA稳定性与翻译控制
mRNA稳定性主要取决于3’—UTR结构
1．poly(A)尾增加mRNA稳定性，
2．3’-UTR中UA序列导致mRNA不稳定．


高手帮我扫盲一下！？

[ Last edited by lifefamily on 2009-5-13 at 15:09 ]
赞一下 回复此楼
4楼2009-05-13 15:06:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongkaichen

金虫 (小有名气)
在大肠杆菌中表达可能就没有polyA修饰，mRNA不稳定我觉得可能就是半衰期短，不能及时翻译。
赞一下 回复此楼
5楼2009-05-13 15:21:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifefamily

关键是，大肠杆菌是如此成熟的一个表达系统，为何就你这个蛋白的mRNA没有polyA修饰呢？
赞一下 回复此楼
6楼2009-05-13 15:38:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongkaichen

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lifefamily at 2009-5-13 15:38:
关键是，大肠杆菌是如此成熟的一个表达系统，为何就你这个蛋白的mRNA没有polyA修饰呢？

这个我不知道怎么回答你，在大肠杆菌里确实有一小段polyA，如果PolyA酶突变了，或其他与ployA形成有关的蛋白突变了导致PolyA不能形成，这样导致mRNA不稳定也可能。其实我想问的重点是假如是mRNA不稳定的话，有什么方法可以检测？如果你要说不可能是mRNA不稳定照成的，那么你就设计一个实验来排除这种可能，理论还是需要实验来验证的。
赞一下 回复此楼
7楼2009-05-13 16:10:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifefamily

★ ★ ★ ★
hongkaichen(金币+4,VIP+0):谢谢讨论，我也没想到别的什么好方法了。 5-14 13:11
RT-PCR加Northern blot
其他想不到了。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-05-14 08:50:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大海一孤舟

铜虫 (小有名气)
在原核生物中转录和翻译是同时进行的，就算是mRNA在不稳定也有一定的表达。如果真的要检测mRNA的稳定性，可以看看在细胞中的含量。
赞一下 回复此楼
9楼2009-05-14 13:13:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rourou6199

银虫 (初入文坛)
好像可以加ActD或者Dox抑制转录后，分几个时间段提RNA做Northern看RNA降解没有
赞一下 回复此楼
10楼2009-05-14 17:18:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hongkaichen 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭