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hongkaichen

金虫 (小有名气)

[交流] 如何检测蛋白在大肠杆菌中的不表达是因为mRNA的不稳定?

RT   如何检测蛋白在大肠杆菌中的不表达是因为mRNA的不稳定?
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lifefamily

★ ★ ★ ★
hongkaichen(金币+4,VIP+0):谢谢讨论,我也没想到别的什么好方法了。 5-14 13:11
RT-PCR加Northern blot
其他想不到了。
8楼2009-05-14 08:50:45
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lifefamily


hongkaichen(金币+1,VIP+0):谢谢回答,这是老师的一个作业,跟实验无关. 5-13 12:55
有怎么一说?
不表达的因素多了:
细胞毒性,N端信号肽,稀有密码子,等等。
你换GST或者Trx融合试过了么?
2楼2009-05-13 10:23:30
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hongkaichen

金虫 (小有名气)

这是老师的一个作业,思考题,跟实验无关,因为mRNA不稳定也可能造成蛋白不表达,所以如果是这种原因,就是让我们用什么方法验证是不是这种原因。开始我觉得可以用观察多聚核糖体现象来验证,但这种方法不能排除菌自身的蛋白表达也能产生这种现象。如果用RT-PCR  P出来了不知道能不能说有mRNA存在,然后排除掉这种原因?
3楼2009-05-13 13:01:09
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lifefamily

真的,我还第一次听说跟mRNA不稳定有关,孤陋寡闻了……
三、mRNA稳定性与翻译控制
mRNA稳定性主要取决于3’—UTR结构
1.poly(A)尾增加mRNA稳定性,
2.3’-UTR中UA序列导致mRNA不稳定.


高手帮我扫盲一下!?

[ Last edited by lifefamily on 2009-5-13 at 15:09 ]
4楼2009-05-13 15:06:50
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