应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 大家来聊聊构建载体那些事
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 2958  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

星星不太萌

新虫 (小有名气)

[交流] 大家来聊聊构建载体那些事 已有5人参与

一把辛酸泪，构建一个载体两个月了，年都没回家好好过，赶回学校接着构建，以为菌落PCR结果也不错，以为就要成功了，结果酶切一直切不出片段，我用的是XhoI,3小时切和半小时一样的结果，失望了

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验所需技术

» 猜你喜欢
1楼 2019-02-23 15:03:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2019-02-23 18:49:05
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

星星不太萌

新虫 (小有名气)
嗯嗯，XhoI在目的片段两端比较靠近的地方都有酶切位点

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2019-02-23 22:41:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
片段浓度要上去，实在连不起来就用无缝克隆
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2019-02-24 09:02:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxd95

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
单酶切后，先用碱性磷酸酶处理载体，防止自连，然后再连接。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
追梦的人
5楼2019-02-24 16:44:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星星不太萌

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zxd95 at 2019-02-24 16:44:02
单酶切后，先用碱性磷酸酶处理载体，防止自连，然后再连接。

具体怎么操作呢？
我先用XhoI单酶切得到了目的片段，和线性载体

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2019-02-24 18:37:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cry_2013

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 星星不太萌 at 2019-02-24 18:37:20
具体怎么操作呢？
我先用XhoI单酶切得到了目的片段，和线性载体
...

单酶切好像需要去磷酸化吧，要不载体容易自连，去磷酸化好像需要去磷酸化酶，需要作用时间再具体就不知道了，说明书上应该都有
赞一下 回复此楼
7楼2019-02-28 09:06:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lizimu566

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by cry_2013 at 2019-02-28 09:06:10
单酶切好像需要去磷酸化吧，要不载体容易自连，去磷酸化好像需要去磷酸化酶，需要作用时间再具体就不知道了，说明书上应该都有...

我们酶切完直接加入去磷酸37度15min
赞一下 回复此楼
8楼2019-02-28 10:32:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 星星不太萌 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +13 hhhhxn.. 2026-03-23 19/950 2026-03-28 04:12 by fmesaito
[考研] 086000调剂 +3 7901117076 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:34 by Jianing_Mi
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 8/400 2026-03-27 16:38 by 18419759900
[考研] 274求调剂 +17 顾九笙要谦虚 2026-03-24 23/1150 2026-03-27 15:16 by caszguilin
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 334求调剂 +3 雨清天晴 2026-03-21 3/150 2026-03-27 11:30 by 不吃魚的貓
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +6 kongweilin 2026-03-26 8/400 2026-03-27 10:18 by FF_16
[考研] 329求调剂 +7 钮恩雪 2026-03-25 7/350 2026-03-27 04:28 by wxiongid
[考研] 342求调剂 +3 加油a李zs 2026-03-26 3/150 2026-03-27 00:29 by wxiongid
[考研] 321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-24 6/300 2026-03-26 20:50 by 不吃魚的貓
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭