24小时热门版块排行榜    

查看: 1144  |  回复: 13
当前主题已经存档。

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

[交流] PCR老是P不出来??

最近做PCR,老是P不出来,不知道什么原因。用以前提的DNA是可以P出来,但是最近新提的基因组DNA就总是失败,我认为引物和酶等包括反应体系都是没有问题的,因为我后来又把以前冻存在-20°的一点DNA重新P了一次,结果是可以成功。
  总之情况就是同样的体系,用以前的DNA做模版可以P出来,而用新提取的DNA做模版却P不出来?怎么会出现这样的结果,难道是我新提取的DNA里面有杂质、蛋白或者是RNA之类的东西,又或者是DNA的浓度太高了?请高手帮我分析分析呀,谢谢!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangzhebasa

木虫 (著名写手)

做个模板浓度梯度看看
...................我是美丽的签名档..................Ifeelsomethinghere.Somethingtrue.
2楼2009-05-06 16:15:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lywinan

捐助贵宾 (职业作家)

1.可以考虑做一个模板的浓度梯度
2.利用DNA纯化试剂盒做一下纯化
3.使用管家基因如β-actin做一个PCR
4.增加引物的浓度
5.增加mg2+浓度
3楼2009-05-06 17:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)

要P 的那段是不是在质粒上啊,是的话就要考虑质粒丢失的问题
模板跑电泳看看吧,可以看看浓度问题
修炼ing,当虫仙……
4楼2009-05-07 09:55:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

1、模板的浓度梯度我做过,分别是稀释10倍,20倍的
2、这个不纯的DNA对PCR是不是有影响呀?我看我的DNA里可能有一些RNA,有一点拖尾
3、以前用这样的引物浓度和反应体系P出来过,现在就是P不出来,是不是有可能是DNA出问题了?
5楼2009-05-07 10:00:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangqshijf2003

金虫 (小有名气)

很简单,DNA质量不行
6楼2009-05-07 14:07:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)

说明这批质量不好,重提。
7楼2009-05-07 19:24:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

profee

建议重提,祝你成功!
8楼2009-05-07 21:20:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuan8285

捐助贵宾 (小有名气)

杏林小生

你DNA的序列检查过没,如果CG比例过高的话就会P不出来,需要改变退火温度以及使用的体系。
加倍珍惜自己
9楼2009-05-08 12:32:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

DNA应该不存在GC含量高的问题吧,有这样的问题话,上次也就不能P出来呀,而我这次把上次提的DNA的一点点残留做模板又P了一次,还是可以P出来,所以我怀疑很大的可能性应该是这次提的DNA有问题,但是现在不知道到底是DNA的浓度的问题还是DNA有污染,或者是有突变!!
10楼2009-05-09 17:38:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 guoxingjun2008 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 5/250 2026-08-17 16:38 by CBFiACZS7HAK
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 6GojgJvkDudM 2026-08-16 7/350 2026-08-17 16:14 by CBFiACZS7HAK
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +4 angus9576 2026-08-17 7/350 2026-08-17 16:11 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 EWi2p09MOOv8 2026-08-16 6/300 2026-08-17 14:02 by EYK67XJMj64E
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 13:49 by EYK67XJMj64E
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 4/200 2026-08-17 12:10 by 4GBAYCdVQoK3
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见