24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3108)
>虫友互识 (769)
>文献求助 (191)
>休闲灌水 (148)
>导师招生 (136)
>考博 (128)
>教师之家 (81)
>找工作 (76)
>硕博家园 (74)
>博后之家 (73)
>论文投稿 (71)
>论文道贺祈福 (66)
>基金申请 (62)
>考研 (57)
>公派出国 (50)
>招聘信息布告栏 (32)

返回列表

当前主题已经存档。

wangqk198738

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1079.6
红花: 2
帖子: 420
在线: 19.8小时
虫号: 531615
注册: 2008-03-23
专业: 生物化学与分子生物学

PCR=长时间的摸索

P不出来不是问题，关键看你是不是有恒心，我也是这样，得长时间的摸索才行，要是一下下就P出来了，谁还学生物呢？根据我的经验我觉得你的好好看看引物了，引物很关键，设计的长短，一般你拿回来的引物那张表单上的Tm值相对较高了些，比如说给你的Tm是55°C，那你试试45°，有时候差距就是这么大。从低到高。一般cDNA不要太多了1微升就够了，酶是关键。新酶0.5就够了，我说的是25微升体系，不行的话试试50微升体系。希望有用！祝好！

赞一下

回复此楼

11楼2009-05-09 18:47:11

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 972.4
散金: 136
帖子: 372
在线: 74小时
虫号: 553723
注册: 2008-05-04
专业: 生物化学

引物也不应该有问题呀，我上次有同样的引物扩增了几次成功几次！真的快要疯了！

赞一下

回复此楼

12楼2009-05-12 10:53:08

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

欣晴5832

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 896.8
散金: 10
红花: 1
帖子: 247
在线: 12小时
虫号: 622374
注册: 2008-10-10
专业: 植物遗传学

你以前p出来所使用的模板的量是多少？把模板的量调一致，大概要有个范围

赞一下

回复此楼

13楼2009-05-12 12:45:42

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 972.4
散金: 136
帖子: 372
在线: 74小时
虫号: 553723
注册: 2008-05-04
专业: 生物化学

以前P出来几次，体系是20ul的，如下：
10×PCR Buffer(含镁离子) 2ul
F引物                            0.4ul
R引物                            0.4ul
dNTP                               0.4ul
Taq酶                            0.6ul
模板DNA                         2ul
ddH2O                            14.2ul
总计                               20ul

以前用这个做成功过几次，最近只是换了模板DNA，就不成功了。

赞一下

回复此楼

14楼2009-05-12 16:23:46

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主 guoxingjun2008 的主题更新

返回列表