24小时热门版块排行榜    

查看: 953  |  回复: 13
当前主题已经存档。

wangqk198738

金虫 (正式写手)

PCR=长时间的摸索

P不出来不是问题,关键看你是不是有恒心,我也是这样,得长时间的摸索才行,要是一下下就P出来了,谁还学生物呢?根据我的经验我觉得你的好好看看引物了,引物很关键,设计的长短,一般你拿回来的引物那张表单上的Tm值相对较高了些,比如说给你的Tm是55°C,那你试试45°,有时候差距就是这么大。从低到高。一般cDNA不要太多了1微升就够了,酶是关键。新酶0.5就够了,我说的是25微升体系,不行的话试试50微升体系。希望有用!祝好!
11楼2009-05-09 18:47:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

引物也不应该有问题呀,我上次有同样的引物扩增了几次成功几次!真的快要疯了!
12楼2009-05-12 10:53:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

欣晴5832

金虫 (小有名气)

你以前p出来所使用的模板的量是多少?把模板的量调一致,大概要有个范围
13楼2009-05-12 12:45:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

以前P出来几次,体系是20ul的,如下:
10×PCR Buffer(含镁离子)    2ul
F引物                               0.4ul
R引物                               0.4ul
dNTP                                0.4ul
Taq酶                               0.6ul
模板DNA                           2ul
ddH2O                              14.2ul
总计                                  20ul

以前用这个做成功过几次,最近只是换了模板DNA,就不成功了。
14楼2009-05-12 16:23:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 guoxingjun2008 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见