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暴走的小鱼干

新虫 (小有名气)

[交流] 在一段基因序列上设计引物却一直跑不出条带 已有4人参与

感觉设计了三对了,一直没有条带是为什么啊,循环数已经很多了,2000多bp,退火也调了几次

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melyliang

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
模板对?尝试进行温度梯度PCR,要是第一次设计引物的话看看网上引物设计要求,设计完让师姐师兄帮忙看看。

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2楼2019-01-21 16:46:52
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elmanbio

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-01-24 12:49:59
1 确定你提取的模板没有问题,通过电泳检测
2 模板没有问题,那就是引物的问题了,通常来说体系也影响结果,但是引物的影响更大
3楼2019-01-22 08:48:58
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Jona_0814

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1. 检查模板,确定模板浓度
2. 调整PCR体系
3. 换个酶试试。

我们有PCR酶试用小样,可以试用一下。
4楼2019-01-22 11:15:39
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暴走的小鱼干

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by elmanbio at 2019-01-22 08:48:58
1 确定你提取的模板没有问题,通过电泳检测
2 模板没有问题,那就是引物的问题了,通常来说体系也影响结果,但是引物的影响更大

但是我设计了四五对引物了,每队引物我在dnaman上面都看了的,都是3bp配对左右

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5楼2019-01-22 20:49:59
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暴走的小鱼干

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by melyliang at 2019-01-21 16:46:52
模板对?尝试进行温度梯度PCR,要是第一次设计引物的话看看网上引物设计要求,设计完让师姐师兄帮忙看看。

我不知道是不是这个基因含有可变剪切的原因,所以老是跑不出来

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6楼2019-01-22 21:41:50
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elmanbio

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 暴走的小鱼干 at 2019-01-22 20:49:59
但是我设计了四五对引物了,每队引物我在dnaman上面都看了的,都是3bp配对左右
...

那你只能考虑重新设计引物了,需要帮忙的话,可以私聊
7楼2019-01-24 14:27:44
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ll19841008

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以考虑巢式PCR或者降落PCR,一次PCR不一定可以看到什么?二次PCR增加浓度。
8楼2019-01-27 15:10:00
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