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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 在一段基因序列上设计引物却一直跑不出条带
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暴走的小鱼干

新虫 (小有名气)

[交流] 在一段基因序列上设计引物却一直跑不出条带 已有4人参与

感觉设计了三对了，一直没有条带是为什么啊，循环数已经很多了，2000多bp，退火也调了几次

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1楼 2019-01-21 15:51:59
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melyliang

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
模板对？尝试进行温度梯度PCR，要是第一次设计引物的话看看网上引物设计要求，设计完让师姐师兄帮忙看看。

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2楼2019-01-21 16:46:52
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elmanbio

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-01-24 12:49:59
1 确定你提取的模板没有问题，通过电泳检测
2 模板没有问题，那就是引物的问题了，通常来说体系也影响结果，但是引物的影响更大
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3楼2019-01-22 08:48:58
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Jona_0814

铜虫 (小有名气)
★
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1. 检查模板，确定模板浓度
2. 调整PCR体系
3. 换个酶试试。

我们有PCR酶试用小样，可以试用一下。
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4楼2019-01-22 11:15:39
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暴走的小鱼干

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by elmanbio at 2019-01-22 08:48:58
1 确定你提取的模板没有问题，通过电泳检测
2 模板没有问题，那就是引物的问题了，通常来说体系也影响结果，但是引物的影响更大

但是我设计了四五对引物了，每队引物我在dnaman上面都看了的，都是3bp配对左右

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5楼2019-01-22 20:49:59
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暴走的小鱼干

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by melyliang at 2019-01-21 16:46:52
模板对？尝试进行温度梯度PCR，要是第一次设计引物的话看看网上引物设计要求，设计完让师姐师兄帮忙看看。

我不知道是不是这个基因含有可变剪切的原因，所以老是跑不出来

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6楼2019-01-22 21:41:50
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elmanbio

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 暴走的小鱼干 at 2019-01-22 20:49:59
但是我设计了四五对引物了，每队引物我在dnaman上面都看了的，都是3bp配对左右
...

那你只能考虑重新设计引物了，需要帮忙的话，可以私聊
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7楼2019-01-24 14:27:44
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ll19841008

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以考虑巢式PCR或者降落PCR，一次PCR不一定可以看到什么？二次PCR增加浓度。
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8楼2019-01-27 15:10:00
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