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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » A549细胞转染
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

[求助] A549细胞转染 已有1人参与

我最近做A549细胞转染，转染效率非常低。用的是lipofectamine2000，很多发表的文章表明用这个试剂转染A549是可以的，怎么我的不行啊，着急！
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1楼 2019-01-21 09:39:27
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芳荷恋雨

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

A549很好转染的，以24孔板为例
day1铺板，使细胞密度第二天有60-80%
day2换无血清培养液饥饿2-4h,有条件的话用OPTI-MEM，每孔400ul
      50ul+2ug质粒/50ul+2ul lipo2000,分别混匀，静置3-5min后混在一起，只能轻吹，重了容易吹断
      混合物静置15-20min后加入到孔板中，此时孔板中体系为500ul,记录时间点
      4-6h后换用正常的含血清的培养液，24h-72h之间观察转染效率
day3观察GFP转染效率还不错哟
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自己选的路，爬也要爬完
3楼2019-01-27 13:57:08
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)
★
你是路人甲(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-01-24 14:31:32
A549这株细胞还是比较好做的，我们实验组用FRECT -siRNA方法过这个细胞，敲低85左右，楼主的铺板密度，转染条件需要优化好
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2楼2019-01-21 17:20:25
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