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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

[求助] A549细胞转染已有1人参与

我最近做A549细胞转染,转染效率非常低。用的是lipofectamine2000,很多发表的文章表明用这个试剂转染A549是可以的,怎么我的不行啊,着急!
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)


你是路人甲(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-01-24 14:31:32
A549这株细胞还是比较好做的,我们实验组用FRECT -siRNA方法过这个细胞,敲低85左右,楼主的铺板密度,转染条件需要优化好
2楼2019-01-21 17:20:25
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芳荷恋雨

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

A549很好转染的,以24孔板为例
day1铺板,使细胞密度第二天有60-80%
day2换无血清培养液饥饿2-4h,有条件的话用OPTI-MEM,每孔400ul
      50ul+2ug质粒/50ul+2ul lipo2000,分别混匀,静置3-5min后混在一起,只能轻吹,重了容易吹断
      混合物静置15-20min后加入到孔板中,此时孔板中体系为500ul,记录时间点
      4-6h后换用正常的含血清的培养液,24h-72h之间观察转染效率
day3观察GFP转染效率还不错哟
自己选的路,爬也要爬完
3楼2019-01-27 13:57:08
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