24小时热门版块排行榜    

查看: 642  |  回复: 6
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

gw917

金虫 (小有名气)

[交流] 有关质粒pBR322的抑酶实验

各位老师同学急求您的帮助:
  
    我不是生化药学的,我现在在做有关抽提pBR322质粒(负超螺旋)的实验。挑菌,加6uL AMP,37°摇菌24小时,用试剂盒提取后,加25uLTE,提取出的质粒非常淡,最让我郁闷的是,加入Topo1酶(使其解旋)水浴15分钟后,竟然质粒看不到了,琼脂胶上什么都没有(怀疑分解了??)。
   提取不成,于是我买了商业化的质粒好贵,3000多,用质粒+酶后,质粒变成偏上的两条带(relex and nicked??),与后面质粒+酶+上市药物或化合物后(抑酶活性)的条带差不多,文献报道药物肯定是有作用的,但是偶做不出来
     可请哪位可以指教一下,解释一下我的图片,不胜感激!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gw917

金虫 (小有名气)

多谢hihoney!
负超螺旋的似乎是解旋了,但是和加入化合物的感觉怎么是一样的呢?无法解释通。。无限郁闷中。。。。。
7楼2009-05-06 08:24:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


PBR322严谨型的,本来提的就不会很多

PS:你做那种生物的TopI?化学物抑制剂用的是喜树碱OR拓扑替康?
2楼2009-05-05 18:54:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


★
gw917(金币+1,VIP+0):多谢啦,我再继续加油,不知道用那种酶做比较好? 5-5 19:26
不同生物拓扑酶的酶活体系会有差异,按文献确实不容易做出来。
3楼2009-05-05 18:58:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gw917

金虫 (小有名气)

我用小牛胸腺做的,难道必须用人Topo酶做效果好吗?我用对照药为CPT。
4楼2009-05-05 19:27:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:14 by xSrQNSSjcgoX
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 10:19 by xSrQNSSjcgoX
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 09:35 by xSrQNSSjcgoX
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 SX5mJmPWDfOO 2026-11-13 3/150 2026-11-15 08:07 by xSrQNSSjcgoX
[基金申请] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-13 3/150 2026-11-15 04:16 by xSrQNSSjcgoX
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 7/350 2026-11-15 03:32 by xSrQNSSjcgoX
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 10/500 2026-11-15 02:15 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 8/400 2026-11-14 22:20 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 7/350 2026-11-14 21:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:26 by ECLTXnJnRSXf
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 9/450 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 6/300 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:11 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 czAiolzR0IJC 2026-11-10 6/300 2026-11-12 11:03 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:38 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:08 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 11/550 2026-11-12 09:57 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:03 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 7/350 2026-11-12 00:44 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:03 by TgvkbZZl9tqB
信息提示
请填处理意见