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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有关质粒pBR322的抑酶实验
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gw917

金虫 (小有名气)

[交流] 有关质粒pBR322的抑酶实验

各位老师同学急求您的帮助：
  
    我不是生化药学的，我现在在做有关抽提pBR322质粒（负超螺旋）的实验。挑菌，加6uL AMP,37°摇菌24小时，用试剂盒提取后，加25uLTE,提取出的质粒非常淡，最让我郁闷的是，加入Topo1酶(使其解旋)水浴15分钟后，竟然质粒看不到了，琼脂胶上什么都没有（怀疑分解了？？）。
   提取不成，于是我买了商业化的质粒好贵，3000多，用质粒+酶后，质粒变成偏上的两条带（relex and nicked??），与后面质粒+酶+上市药物或化合物后（抑酶活性）的条带差不多，文献报道药物肯定是有作用的，但是偶做不出来
     可请哪位可以指教一下，解释一下我的图片，不胜感激！
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1楼 2009-05-05 17:12:09
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
PBR322严谨型的，本来提的就不会很多

PS：你做那种生物的TopI？化学物抑制剂用的是喜树碱OR拓扑替康？
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2楼2009-05-05 18:54:49
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
★
gw917(金币+1,VIP+0):多谢啦，我再继续加油，不知道用那种酶做比较好？ 5-5 19:26
不同生物拓扑酶的酶活体系会有差异，按文献确实不容易做出来。
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3楼2009-05-05 18:58:21
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gw917

金虫 (小有名气)
我用小牛胸腺做的，难道必须用人Topo酶做效果好吗？我用对照药为CPT。
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4楼2009-05-05 19:27:04
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gw917

金虫 (小有名气)
买的小牛胸腺TOPO1
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5楼2009-05-05 19:27:39
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by gw917 at 2009-5-5 19:27:
买的小牛胸腺TOPO1

只要是TopI都应该有这个酶活。
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6楼2009-05-05 20:30:24
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gw917

金虫 (小有名气)
多谢hihoney!
负超螺旋的似乎是解旋了，但是和加入化合物的感觉怎么是一样的呢？无法解释通。。无限郁闷中。。。。。
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7楼2009-05-06 08:24:05
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