24小时热门版块排行榜    

查看: 460  |  回复: 6
当前主题已经存档。

gw917

金虫 (小有名气)

[交流] 有关质粒pBR322的抑酶实验

各位老师同学急求您的帮助:
  
    我不是生化药学的,我现在在做有关抽提pBR322质粒(负超螺旋)的实验。挑菌,加6uL AMP,37°摇菌24小时,用试剂盒提取后,加25uLTE,提取出的质粒非常淡,最让我郁闷的是,加入Topo1酶(使其解旋)水浴15分钟后,竟然质粒看不到了,琼脂胶上什么都没有(怀疑分解了??)。
   提取不成,于是我买了商业化的质粒好贵,3000多,用质粒+酶后,质粒变成偏上的两条带(relex and nicked??),与后面质粒+酶+上市药物或化合物后(抑酶活性)的条带差不多,文献报道药物肯定是有作用的,但是偶做不出来
     可请哪位可以指教一下,解释一下我的图片,不胜感激!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


PBR322严谨型的,本来提的就不会很多

PS:你做那种生物的TopI?化学物抑制剂用的是喜树碱OR拓扑替康?
2楼2009-05-05 18:54:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)



gw917(金币+1,VIP+0):多谢啦,我再继续加油,不知道用那种酶做比较好? 5-5 19:26
不同生物拓扑酶的酶活体系会有差异,按文献确实不容易做出来。
3楼2009-05-05 18:58:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gw917

金虫 (小有名气)

我用小牛胸腺做的,难道必须用人Topo酶做效果好吗?我用对照药为CPT。
4楼2009-05-05 19:27:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gw917

金虫 (小有名气)

买的小牛胸腺TOPO1
5楼2009-05-05 19:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


引用回帖:
Originally posted by gw917 at 2009-5-5 19:27:
买的小牛胸腺TOPO1

只要是TopI都应该有这个酶活。
6楼2009-05-05 20:30:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gw917

金虫 (小有名气)

多谢hihoney!
负超螺旋的似乎是解旋了,但是和加入化合物的感觉怎么是一样的呢?无法解释通。。无限郁闷中。。。。。
7楼2009-05-06 08:24:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gw917 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +5 Soliloquy_Q 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:50 by xyx2012xyx
[考研] 材料学调剂 +6 提神豆沙包 2026-02-28 6/300 2026-03-01 10:49 by sunny81
[考研] 材料284求调剂,一志愿郑州大学英一数二 +4 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:39 by 江科大李老师
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 10/500 2026-03-01 10:02 by 科研狗111
[考研] 290求调剂 +6 材料专硕调剂; 2026-02-28 7/350 2026-03-01 09:21 by L135790
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 284求调剂 +5 天下熯 2026-02-28 5/250 2026-03-01 08:49 by ms629
[考研] 材料类求调剂 +7 wana_kiko 2026-02-28 7/350 2026-03-01 07:55 by ms629
[考研] 298求调剂 +5 axyz3 2026-02-28 5/250 2026-03-01 06:45 by 刘兵
[考研] 285求调剂 +6 满头大汗的学生 2026-02-28 6/300 2026-03-01 06:29 by Trying]
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见