24小时热门版块排行榜    

查看: 550  |  回复: 6
当前主题已经存档。

gw917

金虫 (小有名气)

[交流] 有关质粒pBR322的抑酶实验

各位老师同学急求您的帮助:
  
    我不是生化药学的,我现在在做有关抽提pBR322质粒(负超螺旋)的实验。挑菌,加6uL AMP,37°摇菌24小时,用试剂盒提取后,加25uLTE,提取出的质粒非常淡,最让我郁闷的是,加入Topo1酶(使其解旋)水浴15分钟后,竟然质粒看不到了,琼脂胶上什么都没有(怀疑分解了??)。
   提取不成,于是我买了商业化的质粒好贵,3000多,用质粒+酶后,质粒变成偏上的两条带(relex and nicked??),与后面质粒+酶+上市药物或化合物后(抑酶活性)的条带差不多,文献报道药物肯定是有作用的,但是偶做不出来
     可请哪位可以指教一下,解释一下我的图片,不胜感激!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


PBR322严谨型的,本来提的就不会很多

PS:你做那种生物的TopI?化学物抑制剂用的是喜树碱OR拓扑替康?
2楼2009-05-05 18:54:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)



gw917(金币+1,VIP+0):多谢啦,我再继续加油,不知道用那种酶做比较好? 5-5 19:26
不同生物拓扑酶的酶活体系会有差异,按文献确实不容易做出来。
3楼2009-05-05 18:58:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gw917

金虫 (小有名气)

我用小牛胸腺做的,难道必须用人Topo酶做效果好吗?我用对照药为CPT。
4楼2009-05-05 19:27:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gw917

金虫 (小有名气)

买的小牛胸腺TOPO1
5楼2009-05-05 19:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


引用回帖:
Originally posted by gw917 at 2009-5-5 19:27:
买的小牛胸腺TOPO1

只要是TopI都应该有这个酶活。
6楼2009-05-05 20:30:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gw917

金虫 (小有名气)

多谢hihoney!
负超螺旋的似乎是解旋了,但是和加入化合物的感觉怎么是一样的呢?无法解释通。。无限郁闷中。。。。。
7楼2009-05-06 08:24:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gw917 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +7 zju2000 2026-08-16 7/350 2026-08-17 11:31 by Iktsuarpok9
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +10 Ldrop2023 2026-08-13 10/500 2026-08-17 09:59 by 小豌豆_发芽
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
请填处理意见