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gw917

金虫 (小有名气)

[交流] 有关质粒pBR322的抑酶实验

各位老师同学急求您的帮助:
  
    我不是生化药学的,我现在在做有关抽提pBR322质粒(负超螺旋)的实验。挑菌,加6uL AMP,37°摇菌24小时,用试剂盒提取后,加25uLTE,提取出的质粒非常淡,最让我郁闷的是,加入Topo1酶(使其解旋)水浴15分钟后,竟然质粒看不到了,琼脂胶上什么都没有(怀疑分解了??)。
   提取不成,于是我买了商业化的质粒好贵,3000多,用质粒+酶后,质粒变成偏上的两条带(relex and nicked??),与后面质粒+酶+上市药物或化合物后(抑酶活性)的条带差不多,文献报道药物肯定是有作用的,但是偶做不出来
     可请哪位可以指教一下,解释一下我的图片,不胜感激!
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


PBR322严谨型的,本来提的就不会很多

PS:你做那种生物的TopI?化学物抑制剂用的是喜树碱OR拓扑替康?
2楼2009-05-05 18:54:49
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)



gw917(金币+1,VIP+0):多谢啦,我再继续加油,不知道用那种酶做比较好? 5-5 19:26
不同生物拓扑酶的酶活体系会有差异,按文献确实不容易做出来。
3楼2009-05-05 18:58:21
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gw917

金虫 (小有名气)

我用小牛胸腺做的,难道必须用人Topo酶做效果好吗?我用对照药为CPT。
4楼2009-05-05 19:27:04
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gw917

金虫 (小有名气)

买的小牛胸腺TOPO1
5楼2009-05-05 19:27:39
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


引用回帖:
Originally posted by gw917 at 2009-5-5 19:27:
买的小牛胸腺TOPO1

只要是TopI都应该有这个酶活。
6楼2009-05-05 20:30:24
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gw917

金虫 (小有名气)

多谢hihoney!
负超螺旋的似乎是解旋了,但是和加入化合物的感觉怎么是一样的呢?无法解释通。。无限郁闷中。。。。。
7楼2009-05-06 08:24:05
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