应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Taq酶提取问题，急切希望得到指点
61/1返回列表
查看: 957  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

xiaoxueliu

木虫 (著名写手)

[交流] Taq酶提取问题，急切希望得到指点

那位提取过Taq酶的高手给指点一下：我提得Taq酶活性不高，还有一个特点就是刚开始用还可以，用过2，3次酶的活性越来越低，请问在酶的提取过程中有哪些细节需要注意，还有几个问题：
1，菌液培养的时间和量度？
2，提取过程中离心，水浴的注意事项
3，透析的时间和注意事项，如果透析时间过长，或中间透析时间过长才换新的透析液对美的质量会有什么影响？
急切想得到高手指点，谢谢，谢谢！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-05-03 13:34:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)
★ ★
xiaoxueliu(金币+2,VIP+0):谢谢，不过保存液中有50%的甘油啊 5-6 16:27
你说开始还行，后面不行了，应该是保存的问题把。往保存液中加到10%甘油和1mM DTT吧，那样保存效果好些。还有分管保藏，不要每次都从一个管子里面取。我原来也是做高温酶的，如果你是重组表达，那么水浴时间对酶的影响好象不是很大 30min足够，温度70C就够了。透析一般冰上做，换2小时一次 做两次就好了。高温酶在常温下都是很稳定的，在室温下放24h，酶活都不会变化的。你那么不稳定，应该是保存条件不太对。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-05-03 15:16:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
楼上的 告诫 很中肯。
赞一下 回复此楼
3楼2009-05-03 19:06:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★
xiaoxueliu(金币+1,VIP+0):谢谢 5-6 16:29
酶的表达和提取要注意的地方很多，比如你的菌液培养时间和诱导表达的温度，你需要去摸索一条最适合的途径，才能得到高表达量和比活，如果是诱导表达还要注意诱导od值。酶的保存，如果是-20度的话可以加10-50%的甘油和dtt，如果-70的话可以液氮速冻再保存，也可叫甘油后保存。但是无论那种方法，酶蛋白要避免反复冻融，反复冻融最影响酶的活性，不知道你是不是反复冻融你的Taq了
赞一下 回复此楼
4楼2009-05-03 22:18:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)
还有透析一般要保持低温，你可以在4度冰箱里透析，其间多换几次液可以减少透析时间
赞一下 回复此楼
5楼2009-05-03 22:19:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lsbrc

银虫 (小有名气)
★
xiaoxueliu(金币+1,VIP+0):谢谢 5-6 16:29
提得Taq酶活性不高，还有一个特点就是刚开始用还可以，用过2，3次酶的活性越来越低。说明酶的纯度不够，很可能含有蛋白酶污染，建议跑SDS-PAGE检测一下。Taq本身非常稳定，但在储存过程中，需要加些如Triton、NP40或Geltin等作为Stablizer。
赞一下 回复此楼
6楼2009-05-04 08:49:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaoxueliu 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 20:58 by Equinoxhua
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +3 zju2000 2026-09-26 3/150 2026-09-27 16:26 by lala1008
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:42 by 4IW0sJvtEqX8
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:26 by 4IW0sJvtEqX8
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:21 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:15 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:03 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 oeyPlfmMUpOC 2026-09-26 3/150 2026-09-27 09:13 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:39 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:50 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 5/250 2026-09-25 11:19 by yhq9807
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 7/350 2026-09-25 11:18 by yhq9807
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭