24小时热门版块排行榜    

查看: 850  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xiaoxueliu

木虫 (著名写手)

[交流] Taq酶提取问题,急切希望得到指点

那位提取过Taq酶的高手给指点一下:我提得Taq酶活性不高,还有一个特点就是刚开始用还可以,用过2,3次酶的活性越来越低,请问在酶的提取过程中有哪些细节需要注意,还有几个问题:
1,菌液培养的时间和量度?
2,提取过程中离心,水浴的注意事项
3,透析的时间和注意事项,如果透析时间过长,或中间透析时间过长才换新的透析液对美的质量会有什么影响?
急切想得到高手指点,谢谢,谢谢!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

还有透析一般要保持低温,你可以在4度冰箱里透析,其间多换几次液可以减少透析时间
5楼2009-05-03 22:19:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

jqq1985

银虫 (正式写手)

★ ★
xiaoxueliu(金币+2,VIP+0):谢谢,不过保存液中有50%的甘油啊 5-6 16:27
你说开始还行,后面不行了,应该是保存的问题把。往保存液中加到10%甘油和1mM DTT吧,那样保存效果好些。还有分管保藏,不要每次都从一个管子里面取。我原来也是做高温酶的,如果你是重组表达,那么水浴时间对酶的影响好象不是很大 30min足够,温度70C就够了。透析一般冰上做,换2小时一次 做两次就好了。高温酶在常温下都是很稳定的,在室温下放24h,酶活都不会变化的。你那么不稳定,应该是保存条件不太对。
2楼2009-05-03 15:16:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


楼上的 告诫 很中肯。
3楼2009-05-03 19:06:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)


xiaoxueliu(金币+1,VIP+0):谢谢 5-6 16:29
酶的表达和提取要注意的地方很多,比如你的菌液培养时间和诱导表达的温度,你需要去摸索一条最适合的途径,才能得到高表达量和比活,如果是诱导表达还要注意诱导od值。酶的保存,如果是-20度的话可以加10-50%的甘油和dtt,如果-70的话可以液氮速冻再保存,也可叫甘油后保存。但是无论那种方法,酶蛋白要避免反复冻融,反复冻融最影响酶的活性,不知道你是不是反复冻融你的Taq了
4楼2009-05-03 22:18:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 274求调剂 +7 顾九笙要谦虚 2026-03-24 11/550 2026-03-25 19:49 by 顾九笙要谦虚
[考研] 312求调剂 +4 上岸吧ZJY 2026-03-22 6/300 2026-03-25 19:09 by 星空星月
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +4 小小陈小小 2026-03-22 7/350 2026-03-25 19:07 by 星空星月
[考研] 考研调剂 +5 来好运来来来 2026-03-21 6/300 2026-03-25 18:53 by 来好运来来来
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 359求调剂 +3 王了个楠 2026-03-25 3/150 2026-03-25 12:50 by Dyhoer
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 食品专硕 一志愿双一流 328 +3 xiaom99 2026-03-21 4/200 2026-03-24 21:20 by lailaisimei
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 一志愿陕师大生物学071000,298分,求调剂 +3 SYA! 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分,求调剂 +5 jiajunX 2026-03-22 5/250 2026-03-23 18:07 by YMU施老师
[考研] 316求调剂 +7 梁茜雯 2026-03-19 7/350 2026-03-23 16:21 by lingjue
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 295材料求调剂,一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
信息提示
请填处理意见