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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 求助定点突变方法?

哪位虫友用QuikChange® XL Site-Directed Mutagenesis Kit的方法做过定点突变?具体怎么操作?大家交流一下啊!
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一个人可以不成功,但不可以不成长!
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

谢谢楼上两位的指导!
一个人可以不成功,但不可以不成长!
4楼2009-04-29 17:22:17
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

大致了解一点点,
目的片段首尾设计一对引物p1,p2
在需要突变的位点设计一对引物P3,p4。(此时引物中设计出你需要突变的碱基,突变点最好在引物中间位置)
引物P1p4以目的片段为模板扩出片段T1(回收纯化)
p3p2以目的片段为模板扩出片段T2(回收纯化)
引物p1p2以T1,T2同时为模板扩得片段T3。然后就是以各种方法检测是否突变成功了。
Thank-you,so-blue.
2楼2009-04-29 16:02:55
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zhenaozhao

QuikChange® XL Site-Directed Mutagenesis Kit试剂盒不错,但很贵,可以买一个高保真pfu,再买一个DpnI, 按照QuikChange® XL Site-Directed Mutagenesis Kit方法做就可以了,引物设计在stratagene网站上有。很简单。试一试就知道了。
3楼2009-04-29 16:16:45
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