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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助定点突变方法？
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 求助定点突变方法？

哪位虫友用QuikChange® XL Site-Directed Mutagenesis Kit的方法做过定点突变？具体怎么操作？大家交流一下啊！
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
1楼 2009-04-29 15:27:18
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
大致了解一点点，
目的片段首尾设计一对引物p1，p2
在需要突变的位点设计一对引物P3，p4。（此时引物中设计出你需要突变的碱基，突变点最好在引物中间位置）
引物P1p4以目的片段为模板扩出片段T1（回收纯化）
p3p2以目的片段为模板扩出片段T2（回收纯化）
引物p1p2以T1，T2同时为模板扩得片段T3。然后就是以各种方法检测是否突变成功了。
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Thank-you，so-blue.
2楼2009-04-29 16:02:55
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zhenaozhao

QuikChange® XL Site-Directed Mutagenesis Kit试剂盒不错，但很贵，可以买一个高保真pfu，再买一个DpnI, 按照QuikChange® XL Site-Directed Mutagenesis Kit方法做就可以了，引物设计在stratagene网站上有。很简单。试一试就知道了。
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3楼2009-04-29 16:16:45
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)
谢谢楼上两位的指导！
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
4楼2009-04-29 17:22:17
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