24小时热门版块排行榜    

查看: 1304  |  回复: 8
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

sdauxxx

新虫 (小有名气)

[交流] SmaI和xbaI双酶切

用PBI2301构建植物表达载体时,用smaI和xbaI双酶切,连接后一直筛不出阳性克隆;后来换用XmaI酶切,回收后再用XbaI酶切,连接后依然没有筛出阳性克隆。(XmaI酶是smaI的同裂酶),xmaI和xbaI不是一个公司的,所以分步酶切。

一直没有筛选出,请问有人能做过这方面吗?我该怎么改进,说具体点,万分感谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

不同公司的酶,不能同时双酶切
要分步
takara的东西……呃……要不你试试先用Xba I单切质粒,看看有没有切干净吧
没切干净是一个原因
还有就是连接不好~~
7楼2009-04-28 23:37:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

听起来是连接出了问题更多一些……
什么公司的内切酶和连接酶呢?片段多大?
2楼2009-04-28 22:29:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)

我们这边也在做类似的实验,我们用的是PBI121 ,酶切也遇到点问题。。。

酶切后质粒的量很多,但目的片断很少,几乎看不到。也在找原因。。。。
3楼2009-04-28 23:27:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)

楼主在南京哪所学校?
4楼2009-04-28 23:28:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +5 来好运来来来 2026-03-21 5/250 2026-03-25 18:11 by xcjcqu
[考研] 335分 | 材料与化工专硕 | GPA 4.07 | 有科研经历 +5 cccchenso 2026-03-23 5/250 2026-03-25 18:08 by xcjcqu
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-25 3/150 2026-03-25 17:49 by lenovolsw
[考研] 274求调剂 +7 顾九笙要谦虚 2026-03-24 7/350 2026-03-25 15:18 by baoball
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 材料292调剂 +8 橘颂思美人 2026-03-23 8/400 2026-03-24 16:33 by laoshidan
[考研] 321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-24 4/200 2026-03-24 14:44 by sprinining
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap- 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap-
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 一志愿南昌大学,327分,材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
信息提示
请填处理意见