应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SmaI和xbaI双酶切
91/1返回列表
查看: 1303  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

sdauxxx

新虫 (小有名气)

[交流] SmaI和xbaI双酶切

用PBI2301构建植物表达载体时，用smaI和xbaI双酶切，连接后一直筛不出阳性克隆；后来换用XmaI酶切，回收后再用XbaI酶切，连接后依然没有筛出阳性克隆。（XmaI酶是smaI的同裂酶），xmaI和xbaI不是一个公司的，所以分步酶切。

一直没有筛选出，请问有人能做过这方面吗？我该怎么改进，说具体点，万分感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-04-28 22:15:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
听起来是连接出了问题更多一些……
什么公司的内切酶和连接酶呢？片段多大？
赞一下 回复此楼
2楼2009-04-28 22:29:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)
我们这边也在做类似的实验，我们用的是PBI121 ，酶切也遇到点问题。。。

酶切后质粒的量很多，但目的片断很少，几乎看不到。也在找原因。。。。
赞一下 回复此楼
3楼2009-04-28 23:27:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)
楼主在南京哪所学校？
赞一下 回复此楼
4楼2009-04-28 23:28:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdauxxx

新虫 (小有名气)

SmaI和xbaI双酶切

在南京农大 XmaI是NEB公司的 XbaI是宝生物公司的 请大家多指教
赞一下 回复此楼
5楼2009-04-28 23:31:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdauxxx

新虫 (小有名气)

SmaI和xbaI双酶切

载体是1.6K   片段是1.1K
赞一下 回复此楼
6楼2009-04-28 23:33:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
不同公司的酶，不能同时双酶切
要分步
takara的东西……呃……要不你试试先用Xba I单切质粒，看看有没有切干净吧
没切干净是一个原因
还有就是连接不好~~
赞一下 回复此楼
7楼2009-04-28 23:37:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stfo

铜虫 (小有名气)
用过这两个酶
我当初是分步酶切后连接的

建议换个连接酶吧

SmaI是平末端吧

我用的是
Fermentas快速连接试剂盒
你可以试试
赞一下 回复此楼
8楼2009-04-29 14:03:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
也遇到过相同的问题，我当时先是单酶切回收后再酶切回收，连接也出了问题。后来还是两种酶同时切但是把酶切体系放大几倍（质粒量，酶量不变，buffer量相应扩大倍数，其余空白用水补齐）酶切时间过夜。回收后连接成功了。不妨试试。
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
9楼2009-04-29 15:35:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sdauxxx 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +5 来好运来来来 2026-03-21 5/250 2026-03-25 18:11 by xcjcqu
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 各位老师您好：本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 07化学280分求调剂 +7 722865 2026-03-23 7/350 2026-03-25 09:29 by aa331100
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 食品专硕 一志愿双一流 328 +3 xiaom99 2026-03-21 4/200 2026-03-24 21:20 by lailaisimei
[考研] 300求调剂，材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 277分求调剂，跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123！
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭