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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 大肠杆菌表达GFP但是没有表达出来
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mmiaomi

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌表达GFP但是没有表达出来

请各位大神帮帮忙，我从pCAMBIA1302(植物双元表达载体)中克隆GFP基因，插入pDE2(原核表达载体)，转入大肠杆菌，用IPTG诱导表达，但是没有看到荧光。。是哪一步有问题呢？T﹏T

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1楼 2018-11-26 09:11:09
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
换pet28载体吧，表达效果杠杠的

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2楼2018-11-27 22:06:59
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小冀-

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你可以先不考虑荧光，先确定一下蛋白有没有表达，没表达是质粒构建的问题，表达的话就要考虑表达量的问题
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···
3楼2018-11-28 14:38:57
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mmiaomi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小冀- at 2018-11-28 14:38:57
你可以先不考虑荧光，先确定一下蛋白有没有表达，没表达是质粒构建的问题，表达的话就要考虑表达量的问题

有什么办法可以确定蛋白的表达呢？

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4楼2018-11-29 09:39:04
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mmiaomi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2018-11-27 22:06:59
换pet28载体吧，表达效果杠杠的

pet28a是不是只是在bl21中表达呢？

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5楼2018-11-29 09:39:29
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小冀-

版主 (著名写手)

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引用回帖:
4楼: Originally posted by mmiaomi at 2018-11-29 09:39:04
有什么办法可以确定蛋白的表达呢？
...

提一下蛋白，跑个胶就好了
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···
6楼2018-11-29 09:41:43
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