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大片段 重叠PCR
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片段A 2.4K 片段B 3K A和B进行重叠PCR 首先进行了梯度PCR（体系20μl），发现退火温度68-72之间都可以看到目的条带 只是不是特别亮的条带 之后用71℃的退火温度进行重叠PCR，100μl体系，结果并没有看到目的条带！ 怀疑100μl体系配置的时候可能是人为原因出现问题，又重新进行了一次梯度PCR，结果与第一次一样，68-72℃能出现条带。 后又重新大体系进行了一次 但是仍然没有条带 之后怀疑大体系不能成功就配了500μl的体系每20μl分装到小PCR管里 但是仍未成功 不知道什么原因 请做重叠PCR的大神赐教 感激涕零！ |
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