应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶切问题
91/1返回列表
查看: 482  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

04swlcm

金虫 (小有名气)

[交流] 酶切问题

大家好，我想问一下，PCR产物可以直接酶切吗？（设计引物时已加酶切位点和保护碱基）还是需要与T载体连接后在酶切呢？非常感谢！
另外，我想知道芽孢杆菌感受态细胞的制备与大肠杆菌感受态制备有区别吗？制备时有没有特别需要注意的？Thank  you！
请大家不吝赐教，小女子先谢了哈！哈哈
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-04-22 21:44:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbyu007

木虫 (正式写手)
可以直接酶切，第二个问题不知道
赞一下 回复此楼
我是笨笨鱼~~~
2楼2009-04-22 22:01:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

04swlcm

金虫 (小有名气)
还是很感谢啦……
赞一下 回复此楼
3楼2009-04-22 22:15:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuer413023

至尊木虫 (文坛精英)

没事领金币
我有一个师兄做芽孢杆菌感受态的，明天我帮你问问
赞一下 回复此楼
上邪!我欲与君相知，长命无绝衰。山无陵，江水为竭，冬雷震震，夏雨雪，天地合，乃敢与君绝！
4楼2009-04-22 22:58:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)
酶切后出现粘性末端。。。。PCR 产物不是粘性末端。不过，酶切前最好跑胶回收，PCR产物混合物会影响酶的功能。
赞一下 回复此楼
5楼2009-04-22 23:26:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

04swlcm

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wuer413023 at 2009-4-22 22:58:
我有一个师兄做芽孢杆菌感受态的，明天我帮你问问

先谢谢了哈，(*^__^*)
赞一下 回复此楼
6楼2009-04-23 00:01:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cascc

铜虫 (小有名气)
即使加了保护碱基切得效率也比较低，我建议你不必省这点事情，到后来有问题更麻烦，况且连接到T载体上测序和克隆都方便些。你觉得呢？也就是多花一天时间。
赞一下 回复此楼
7楼2009-04-24 21:56:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

04swlcm

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by cascc at 2009-4-24 21:56:
即使加了保护碱基切得效率也比较低，我建议你不必省这点事情，到后来有问题更麻烦，况且连接到T载体上测序和克隆都方便些。你觉得呢？也就是多花一天时间。

是吗？我才接触分子，我是做定向进化（易错PCR），我需要在巨大芽孢杆菌里表达，再筛选有益突变子。
你说的就相当于把易错PCR产物连在T载体上，再酶切出目的基因，在与表达载体连接…………？？？这一步就相当于增加酶切效率？？我看有些文献是直接切的，
我才接触分子实验，很多地方不太懂，希望大家多提意见，多交流！谢谢
赞一下 回复此楼
8楼2009-04-24 23:41:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cascc

铜虫 (小有名气)
如果你要做表达，建议还是先将片段连接到T载体后测序，正确后再从T载体切下连接到表达载体，建议使用保真性好的酶，防止点突变。但是记得如果用高保真酶，PCR反应结束后加上A，这样才能连接到T载体。如果你直接PCR产物测序，是测不到点突变的，不能反映真实情况。
赞一下 回复此楼
9楼2009-04-25 11:52:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 04swlcm 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 20:58 by Equinoxhua
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利，还能抢救一下吗？ +5 13108017953 2026-09-21 5/250 2026-09-27 16:46 by Leogzhya
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +3 zju2000 2026-09-26 3/150 2026-09-27 16:26 by lala1008
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:42 by 4IW0sJvtEqX8
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:26 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:15 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 oeyPlfmMUpOC 2026-09-26 3/150 2026-09-27 09:13 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:39 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:50 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 5/250 2026-09-25 11:19 by yhq9807
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭